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粘質沙雷伯氏菌注意事項
發布時間：2017-05-19瀏覽次數：1928返回列表
粘質沙雷伯氏菌注意事項如下：
1、菌種操作應在無菌條件下進行，防止雜菌污染。
2、取細胞的過程中注意帶好防凍手套，護目鏡。此項尤為重要，細胞凍存管可能漏入液氮，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導致爆炸。
3、微生物菌種應保藏于低溫、清潔和干燥的地方，室溫放置時間過長會導致菌種衰退。
4、離心前須加入少量培養液。細胞解凍后二甲基亞砜濃度較高，注意加入少量培養液可稀釋其濃度，以減少對細胞的損傷。
5、斜面菌種保藏時間通常為3-6個月，應根據菌種狀況及時轉接；凍干菌種保藏時間通常為2-15年；菌種保存使優良菌種的性狀保持穩定，人為地創造條件，使菌種的新陳代謝活動處于不活潑狀態，即選取優良菌種的休眠體（孢子或芽孢）或富有生命力的懸浮液在低溫或脫水狀態下保存。
（1）脫水保存法
①石蠟油封存法，在斜面菌種培養物上,倒上滅菌后的石蠟油，高出斜面1cm，于4℃冰箱或低溫干燥處保存，粘質沙雷伯氏菌保存中這種方法不適用于能利用石蠟油作碳源的微生物，保存期為一年以上。
②冷凍干燥法,將孢子懸浮液與保護劑（一般用脫脂牛奶或血清）相混合，放在安瓿管內于-20～-30℃的乙醇浴中速凍。然后，在低溫下用真空泵抽干，并用五氧化二磷或干冰使水汽結凍，熔封安瓿管，于低溫下保存。保存期可達5～10年之久。
③沙土保存法，能產孢子的細菌、放線菌及霉菌可采用此法保存,即將沙和土以3:2比例混合，經稀酸處理洗凈過篩,裝入小試管內,裝置高度為1cm;滅菌2～3次，烘干后即可將在斜面培養基上生長良好的孢子，用無菌蒸餾水2～2.5ml制成孢子懸液，吸取少許加入沙土管中，經真空抽干，外觀呈松散狀態,于4℃冰箱保存，保存期可達5～7年。
（2）低溫保存法
①液氮超低溫保存法，將生長穩定期的粘質沙雷伯氏菌細胞懸浮在10％甘油或其他低冰點液體中，密封于安瓿管內，然后控制冷卻速度，使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時，即可置于-150～-196℃的液氮罐中保存。大多數微生物如病毒、噬菌體、多種細菌、放線菌、酵母和原蟲、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物，都可用此法長期保存。
②簡單保存法，將瓊脂斜面孢子培養物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養物置于4℃冰箱保存,保存時間不超過1～2個月，若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟，以隔外界空氣和水汽,保持時間可達3～4個月。
6、凍存液的問題：凍存液的配置已是常識，在這里不作詳述，但二甲基亞砜（DMSO）對細胞不是完全副作用，在常溫下，二甲基亞砜對細胞的毒副作 較大，因此，必須在1-2min內使凍存液完全融化。如果復蘇溫度太慢，會造成細胞的損傷，二甲基亞砜（DMSO）選擇進口產品。
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