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養(yǎng)好細(xì)胞注意點(diǎn)（二）
發(fā)布時(shí)間：2017-03-24瀏覽次數(shù)：1663返回列表
（一）何時(shí)須更換培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中是否須添加抗生素。
視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定，或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時(shí)間，按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。
一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下，培養(yǎng)基中可以添加抗生素。 按1％體積分?jǐn)?shù)加入雙抗貯存液(青霉素+鏈霉素)，使青霉素和鏈霉素的終濃度分別為100 U／mL和100 μ／mL。
(二）貼壁細(xì)胞傳代時(shí)所使用的 trypsin-EDTA 濃度及相應(yīng)處理
一般使用的 trypsin-EDTA 濃度為 0.25% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。次開(kāi)瓶后應(yīng)立即少量分裝于無(wú)菌試管中，保存于 –20 ℃，避免反復(fù)冷凍解凍造成 trypsin 的活性降低，并可減少污染的機(jī)會(huì).。
（三）將一般動(dòng)物細(xì)胞離心下來(lái)，離心速率多少
回收動(dòng)物細(xì)胞，其離心速率一般為 1 000 rpm，5~10 分鐘，過(guò)高的轉(zhuǎn)速，將造成細(xì)胞死亡。
（四）細(xì)胞的接種密度
依照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的接種密度或稀釋分盤(pán)的比例接種即可。細(xì)胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)的重要原因之一。
（五）細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基的成分及DMSO的等級(jí)
動(dòng)物細(xì)胞冷凍保存時(shí)常使用的冷凍培養(yǎng)基是含 5~10% DMSO （dimethyl sulfoxide） 和 90~95 % 原來(lái)細(xì)胞生長(zhǎng)用的新鮮培養(yǎng)基均勻混合。注意：由于 DMSO 稀釋時(shí)會(huì)放出大量熱能，故不可將 DMSO 直接加入細(xì)胞液中，必須使用前先行配制完成。冷凍保存使用的 DMSO 等級(jí)，必須為 Tissue culture grade 的 DMSO ，其本身即為無(wú)菌狀況，次開(kāi)瓶后應(yīng)立即少量分裝于無(wú)菌試管中避光保存。
（六）冷凍保存細(xì)胞的方法及冷凍細(xì)胞濃度
將貼壁細(xì)胞消化后離心收集，懸浮細(xì)胞直接離心收集，以含有DMSO完全培養(yǎng)基或胎牛血清的凍存液重懸細(xì)胞至終濃度約1x106/ml。。以每管1～2ml分裝至凍存管中。用熱材料包裹置-70攝氏度冰箱冷凍過(guò)夜。次日保存到液氮中。
冷凍管內(nèi)細(xì)胞數(shù)目一般為 1x106 cells/ml vial，融合瘤細(xì)胞則以 5x106 cells/ml vial 為宜。
