HCCLMS細胞，HCCLMS現(xiàn)貨
- 產(chǎn)品/服務(wù)：HCCLMS細胞，HCCLMS現(xiàn)貨
- 型 號：HCCLMS
- 品 牌：ATCC
- 單 價：面議
- 更新日期：2020-04-21
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數(shù)：1113
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HCCLMS細胞，HCCLMS現(xiàn)貨 常見問題及解決辦法：
1）對于生長緩慢的貼壁細胞：可采用適當(dāng)?shù)奶岣吲囵B(yǎng)基中血清濃度，或隔日換液的方法來保證細胞的狀態(tài)和生長速度。
2）對于生長不均的貼壁細胞：在培養(yǎng)過程中若出現(xiàn)細胞分布明顯不均時（即某一區(qū)域細胞已重疊生長，而旁邊則為一塊空白），此時可將細胞進行消化，重新打散，貼壁，加入新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。
3）細胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以離心去掉，留10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細胞生長至匯合度80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。
HCCLMS細胞，HCCLMS現(xiàn)貨 之細胞消化不下來原因：
1）有可能是你的培養(yǎng)液沒有去除干凈，因為培養(yǎng)液可以中止消化。所以建議用PBS沖洗兩次。然后再加EDTA.
2）加大EDTA的濃度 ，可以選擇0.1％與trypsin混合使用，加大以上溶液的體積，可以用2ml。
3）37度溫度要夠。
4）實時查看，當(dāng)看到鏡下細胞折光度有改變，就是有作用，然后用培養(yǎng)液將細胞沖洗下來。
5）用冰D-Hank's液洗細胞兩次；
6）用剛解凍的冷的胰酶（注意不要37度孵育）1-2ml/100ml的培養(yǎng)瓶，開過口的和時間長的都不用。
免疫共沉淀（co-immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。
原理：
當(dāng)細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質(zhì)x的抗體免疫沉淀x，那么與x在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)y也能沉淀下來。這種方法常用于測定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。
優(yōu)點：
（1）相互作用的蛋白質(zhì)都是經(jīng)翻譯后修飾的，處于天然狀態(tài)；
（2）蛋白的相互作用是在自然狀態(tài)下進行的，可以避免人為的影響；
（3）可以分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復(fù)合物。
缺點：
（1）可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用；
（2）兩種蛋白質(zhì)的結(jié)合可能不是直接結(jié)合，而可能有第三者在中間起橋梁作用；
（3）必須在實驗前預(yù)測目的蛋白是什么，以選擇后檢測的抗體，所以，若預(yù)測不正確，實驗就得不到結(jié)果，方法本身具有冒險性。
注意的問題：
（1）細胞裂解采用溫和的裂解條件，不能破壞細胞內(nèi)存在的所有蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用，多采用非離子變性劑（NP40或Triton X-100）。每種細胞的裂解條件是不一樣的，通過經(jīng)驗確定。不能用高濃度的變性劑（0.2%SDS），細胞裂解液中要加各種酶抑制劑。
（2）使用明確的抗體，可以將幾種抗體共同使用。
（3）使用對照抗體：
單克隆抗體：正常小鼠的IgG或另一類單抗
兔多克隆抗體：正常兔IgG
在免疫共沉淀實驗中要保證實驗結(jié)果的真實性，應(yīng)注意以下幾點：
（1）確保共沉淀的蛋白是由所加入的抗體沉淀得到的，而并非外源非特異蛋白，單克隆抗體的使用有助于避免污染的發(fā)生。
（2）要確保抗體的特異性，即在不表達抗原的細胞溶解物中添加抗體后不會引起共沉淀。
（3）確定蛋白間的相互作用是發(fā)生在細胞中，而不是由于細胞的溶解才發(fā)生的，這需要進行蛋白質(zhì)的定位來確定。
HCCLMS細胞，HCCLMS現(xiàn)貨 細胞株狀態(tài)良好，飽滿，光澤度好，活力強，傳代次數(shù)少，價格優(yōu)惠，詳細關(guān)于CHO-K1細胞價格|培養(yǎng)條件|來源|生長狀態(tài)|細胞形態(tài)|特征特性等致電：！
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