Walker256(Walker-256)大鼠肝癌細(xì)胞

上海素爾細(xì)胞庫為您提供Walker256(Walker-256)大鼠肝癌細(xì)胞(復(fù)蘇細(xì)胞、凍存細(xì)胞)具體細(xì)胞培養(yǎng)條件,代數(shù)以及來源問題請與在線客服聯(lián)系咨詢。 》》在線客服QQ:1提供耐藥細(xì)胞株,細(xì)胞染色...
Walker256(Walker-256)大鼠肝癌細(xì)胞描述:
生長特性:貼壁生長
微生物及支原體檢測:細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌
Walker256(Walker-256)大鼠肝癌細(xì)胞培養(yǎng)條件:
完全培養(yǎng)基:90%RPMI-1640 +10%胎牛血清+1%P/S
血清我們推薦用:
GibcoFBS:10099-141或HycloneFBS:SH30084.03。優(yōu)質(zhì)血清,盡在上海素爾生物 www.biosuer.com !
培養(yǎng)條件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%
安全性:所有腫瘤和病毒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。
Walker256(Walker-256)大鼠肝癌細(xì)胞凍存細(xì)胞處理方法:
收到細(xì)胞后,檢查外包裝是否完整,干冰是否完好,細(xì)胞凍存管是否完好且未溶解。如有破損、溶解等問題,請及時(shí)聯(lián)系 400-1515-198。細(xì)胞若不立即復(fù)蘇,請將細(xì)胞置于液氮中保存。若復(fù)蘇請進(jìn)行以下操作:
1. 75%酒精噴凍存管后,用干凈的紙或酒精棉球擦拭凍存管,放入超凈臺。
2. 預(yù)熱細(xì)胞完全培養(yǎng)基,準(zhǔn)備一根新的 15mL 無菌離心管和一個無菌的 T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
3. 將 5ml 完全培養(yǎng)基添加到 T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶,備用。將 5ml 完全培養(yǎng)基添加到 15ml 離心管中,備用。
4. 準(zhǔn)備 37℃水浴,迅速取出細(xì)胞,將凍存管放入水浴中快速搖晃使之融化。
5. 融化完全后的凍存管酒精棉球擦拭,在超凈臺中打開凍存管,用 1mL 移液器將細(xì)胞懸液取出,加入到準(zhǔn)備好的含培養(yǎng)基的離心管中,混勻,放入離心機(jī)中, 1200rpm 離心3-5min。
6. 離心停止后取出離心管,小心地棄上清液,加入 1ml 完全培養(yǎng)基,輕吹打混勻成懸液,全部吸取轉(zhuǎn)移到步驟 3 中準(zhǔn)備的 T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,混勻后放置37℃,5%CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
7. 次日于顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),視情況可換液或直接傳代實(shí)驗(yàn)。
復(fù)蘇細(xì)胞一般采用快速融化法,以保證細(xì)胞外結(jié)晶快速融化,以避免慢速融化水分滲入細(xì)胞內(nèi),再次形成胞內(nèi)結(jié)晶損傷細(xì)胞。
注:收到細(xì)胞后請及時(shí)處理,一周內(nèi)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞異常,請及時(shí)聯(lián)系 ,并提供相關(guān)圖片及說明!
Walker256(Walker-256)大鼠肝癌細(xì)胞貼壁細(xì)胞的傳代:對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml完全培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入完全培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
Walker256(Walker-256)大鼠肝癌細(xì)胞懸浮細(xì)胞的傳代:一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入完全培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
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