消滅細胞培養
發布時間：2019-05-28瀏覽次數：1034返回列表
當清晨的陽光滿照大地時，在細胞培養室的角落，倒置顯微鏡旁，總會聚集著幾個孩紙，時不時的各種感慨。啊……細胞又長滿了！咦……細胞咋飄了好多？唉……這個細胞狀態好差，能不能長起來？完了完了，細胞污染了……
各種細胞，總會有各樣問題讓人猝不及防。
雖說細胞培養是基礎性的技術，但并不是每個人都能把每種細胞養的很好呢！
今天小編就來說說細胞培養室里細胞污染的事兒。
常見的細胞污染除了來自其它細胞系的交叉污染外，包括支原體、細菌、真菌污染。這些微生物污染對細胞產生的影響很大呢！例如，它們會與宿主細胞競爭營養；分泌酸性或堿性的副產物，使宿主細胞停止生長；產生對細胞直接有毒的H2O2等等。
有同學說，我使用了無菌的試劑和耗材，也遵循了無菌操作的要求，然而……還是莫名污染了。隔壁的同學還沒有我做的仔細呢！
那么，這種情形下，細胞到底為什么會污染呢?細胞污染要怎么辦呢？
小編覺得此同學和彼同學，zui大的差異恐怕是操作環境了。給大家提個醒，細胞培養室的環境控制尤為重要啦。
有這樣一篇文獻[1],作者對比了正常細胞培養室和污染培養室，在可能污染的位置放了血培養皿，根據微生物的生長狀況，研究細胞污染的原因。以下是代表性的培養結果。
污染物是毋庸置疑的源頭，培養室的空氣、培養箱內循環的空氣、培養箱的層架以及顯微鏡的載物臺和物鏡都可能是污染源。
其實，特別容易成為污染源的地方有這么幾個：
1）空調（估計是細胞培養室沒有做層流，也不經常清洗）。
2）生物安全柜的空氣過濾系統。
3）生物安全柜的進風口（如下圖黃線圈出的位置，操作不慎的話，很容易把培養基或者血清之類的東西滴進這個風口，里面長個霉什么的都是正常的，因為你不會及時拆開清理）。
4）顯微鏡（一般也不會有人用84擦顯微鏡吧）
。
5）培養箱的水盤和復蘇細胞用的水浴鍋（基本上是溫床，但是可以在里面加入硫酸銅，并且周期性更換來避免長菌，但問題是硫酸銅會損傷不銹鋼）。
6）離心機（也是重災區）。
7）液氮罐（這個估計大家都不會注意的，但好在液氮罐污染可能性比較低）。
如果出現細胞污染的情況，勸你直接加入84，滅活以后丟棄。萬一不幸，真菌肆虐，細胞培養室還要用甲醛熏蒸。
但是，你的細胞特別珍貴，污染了，怎么辦？那就要用抗生素了！
1）、zui常用：青霉素、鏈霉素聯合抑制細菌，即所謂的“雙抗”，主要針對革蘭氏陽性菌、陰性菌；對于細菌的感染也可用慶大或卡那霉素；
2）、如果真菌污染嚴重，可用兩性霉素／制霉菌素控制；
3）、若為支原體污染，可用慶大霉素／四環素／紅霉素；
注意，抑制真菌的抗生素，對細胞都有比較大的傷害。使用前，一般都建議先做預實驗，估計對細胞本身的影響。
本次的細胞培養就寫到這里。關于細胞培養更多的故事，請后續關注~
今天，你的細胞還好么？
