細胞污染怎么辦
發布時間：2019-05-22瀏覽次數：910返回列表
zui近，小編的細胞總是處于無休止的污染，污染，復蘇和再污染的循環中。
我相信有一個以上的童鞋有這樣的麻煩，所以今天我們將討論細胞污染的問題。
先，您需要知道什么是細胞污染 - 任何對細胞生長有害的成分或導致細胞不純的異物都被視為污染。根據污染源，細胞污染可分為化學污染，物理污染和生物污染。
一是化學污染
用于細胞培養的培養基用高壓蒸汽滅菌。其中，血清是細胞培養中常用的培養基，血清中存在潛在的化學污染。此外，血清成分不確定，血清對不同細胞的生長有不同的影響，包括毒副作用。
二是物理污染
物理污染主要是指通過溫度，振動，輻射和輻射等物理因素破壞細胞。細胞培養基等暴露于輻射或紫外光引起細胞代謝的改變。
恒溫培養箱周圍有設備產生機械振動，也可能對細胞生長有影響。
三，微生物污染（這是我們經常遇到的）
細菌：
常見的污染物之一，如大腸桿菌和葡萄球菌，是常見的細菌污染。細菌污染很容易找到。當培養的細胞被細菌污染時，培養液將變渾濁并且pH將改變。還有少量的培養液通過肉眼觀察而沒有太大變化，細菌只能在顯微鏡下找到。
如果您正在飼養自己的細胞，建議您每天查看它們。
解：
1）無論什么污染，只要細胞被污染，如果不是非常珍貴的細胞，丟棄并重新培養。
在這里進行再培養時，要注意自己細胞的污染狀況。如果它在傳遞時被污染，則取決于受污染的光盤數量。如果全部污染，那么所有的東西都被更換，先取出試劑。原因是，等待您停止污染，您可以嘗試使用原始試劑。
如果更換試劑或污染，則需要清潔培養箱和房間;如果是污染之一，可能是你自己操作的原因，下次需要多加注意，
通常，我們只需要在需要使用它們時提高細胞。它很少用于練習我們的手。因此，污染的一時刻是確保下一個細胞不會污染，然后細胞被提升并慢慢找到原因。
2）如果細胞非常稀少，需要保存珍貴細胞，建議配置含有10倍雙抗體PBS和5倍雙抗體的完整培養基。然后用10倍雙抗體PBS洗滌細胞5-10次。
然后，細胞用5倍雙抗體完全培養洗滌3次以上，培養后每1小時更換一次，zui后培養過夜2倍雙抗體培養基，替換為雙抗生素完全培養基。第二天。培養，傳代兩次以上，如果沒有發現污染，可將其冷凍，并使一些細胞在沒有抗生素的培養基中繼續培養超過48小時，zui后確定細胞不含污染物。
菌：
其中一種常見的污染物是曲霉菌，白色念珠菌，酵母，黑霉病，孢子，并且在雨季更容易受到污染。現在我們正處于雨季，真菌也來了。
真菌生長相對緩慢，并且在疾病開始時對細胞生長沒有太大影響。先，如果只是觀察細胞，可能會被忽略，但經過很長一段時間后，細胞的活力會變差。培養基是透明的，不會改變顏色。其中可以看到白色或淺黃色的浮動物體。在顯微鏡下還有絲狀，管狀，樹枝狀或橢圓形物質。念珠菌和酵母菌株呈橢圓形。當你看到明顯的菌絲時。
解：
1）因為霉菌有孢子，所以酒精，清潔和熄滅，紫外線等不可能去除霉菌！上面的一個，不重要，立即處理。或與其他細胞分離，更換所用的實驗室設備和試劑。
2）zui好防止真菌，用硫酸銅溶液擦拭CO2培養箱，并在水盤中加入飽和量的硫酸銅。
3）將飽和消毒的磷酸氫二鈉高鹽液加入培養箱的托盤中，以防止霉菌污染。
4）應定期（1月左右）清潔孵化器，特別是在雨季。
5）為防止霉菌污染，在培養基或放線菌素D或雙抗體中加入3ul / ml兩性霉素或制霉菌素。
6）zui重要的是培養良好的無菌概念，避免將培養基灑入培養箱和生物安全柜。這些培養基灑在培養箱中，為細菌和真菌的繁殖提供了良好的條件。
7）如果被污染，將所有細胞從受污染的CO2培養箱中轉移出來并用過氧乙酸（所有，特別是四個角落）清洗培養箱。將過乙酸置于培養箱中1小時以使蒸汽充滿。在過乙酸的氣味消散后，將其轉移到細胞中。
8）徹底消毒環境。整個培養室用福爾馬林和高錳酸鉀熏蒸。用苯酚洗滌培養箱內部，包括托盤，密封2天。
9）一旦細胞被污染，就很難保存。即使使用制霉菌素或放線菌素D，它也是一種傷害敵人10,000的方法。高濃度的抗真菌劑對細胞有毒。
如果發現新的污染，pbs洗幾次細胞，盡可能洗滌細菌，然后用兩性霉素25ug / ml處理12-24小時，改變溶液后改變兩性霉素3-5ug / ml，改變每天連續液體，連續處理2-3天后，繼代培養后，稍微接種到35mm培養皿中，不含兩性霉素，觀察霉菌是否繼續生長，剩余的傳代細胞繼續加入兩性霉素直至不是細胞添加沒有霉菌生存。 。
黑膠蟲：
它可以穿透過濾膜或通過空氣傳播。在低倍率下是黑點。黑蟲可以在高放大倍數下游泳和游泳。一般來說，它不會影響太多。仍然可以使用細胞。的。通常，細胞生長狀態良好，觀察到的移動物體沒有顯著增加，并且培養基的顏色和透明度沒有顯著改變，并且在同一批血清培養細胞中可以發現類似的現象。它對細胞生長狀態沒有顯著影響，并且在細胞增殖旺盛后自然消失，除了更換血清外不需要特殊處理。
可能的污染原因：可能有許多原因，如液體消毒，操作問題，環境問題等。
定期預防污染：
1，在培養基中加入雙抗體，預防量可以，10ul / ml。然而，雙抗體會影響細胞的狀態，因此有必要在轉染前去除雙抗體并檢測細胞的某些指標，以避免影響實驗結果。
2，培養箱應定期或紫外線消毒，培養箱應用酒精和解結器進行檢測。培養箱中的水優選為三蒸水。
3，超凈平臺物料提取設備培養液瓶操作必須按規定操作，不要隨意操作，快速，頻繁地四處走動。
4，超潔凈平臺的風扇不能太大，風扇要6-8格。否則也可能導致霉菌污染
5.無菌室用甲醛熏蒸后，可用相同量的氨水中和，可在約數小時內操作。
6，操作人員個人原因：這是zui可預防的，在使用設備之前必須檢查解決方案是否可用，是否過時，如果您是過時的，請不要冒險，請務必重新消毒或定期治療，特別是有時沒有面罩，手套，并且在操作時大聲說話是zui不合適的。
zui后，小編想說：
細胞污染，預防是硬道理！ ！ ！不要考慮補救措施，失去兩者并不是一個好主意，zui重要的是預防！預防！預防！ ！ ！
