雞ELISA試劑盒的操作步驟及注意事項
發(fā)布時間:2017-11-23瀏覽次數(shù):925返回列表
雞ELISA試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中雞 BAD 水平。用純化的雞 BAD 抗體包被微孔 板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入BAD,再與HRP標記的BAD抗體結合, 形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色TMB在HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的BAD呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中雞BAD濃度。于測定雞血清、血漿及相關液體樣本中BAD含量。其操作步驟及注意事項如下:
一、試劑盒操作步驟
1、標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照相關表格在小試管中進行稀釋。
2、加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3、溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。
4、配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6、加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
7、溫育:操作同 3。
8、洗滌:操作同 5。
9、顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。
10、終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11、測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
二、雞ELISA試劑盒注意事項
1、所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
2、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
3、底物請避光保存。
4、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未 用完,板條應裝入密封袋中保存。
5、請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD 值大于標準品孔孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
6、各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間 控制在5分鐘內,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
7、本試劑不同批號組分不得混用。
8、濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
一、試劑盒操作步驟
1、標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照相關表格在小試管中進行稀釋。
2、加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3、溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。
4、配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6、加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
7、溫育:操作同 3。
8、洗滌:操作同 5。
9、顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。
10、終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11、測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
二、雞ELISA試劑盒注意事項
1、所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
2、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
3、底物請避光保存。
4、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未 用完,板條應裝入密封袋中保存。
5、請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD 值大于標準品孔孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
6、各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間 控制在5分鐘內,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
7、本試劑不同批號組分不得混用。
8、濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
9、如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
10、雞ELISA試劑盒嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。






