植物ＥＬＩＳＡ試劑盒實驗前的準備工作
發布時間：2017-08-10瀏覽次數：841返回列表
導讀：在實驗室，對植物ＥＬＩＳＡ試劑盒準備一般不太注意，通常的做法是，在實驗時將試劑從冰箱中拿出來即用，而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時間不夠的問題，其直接的后果是對一些弱陽性標本的檢測出現假陰性。所以我們一定要做好植物ＥＬＩＳＡ試劑盒在使用前的準備工作。
因此，在ELISA測定中試劑的準備為關鍵的是，在實驗開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20min以上后，再進行測定，以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的，主要是為了在后面的溫育反應步驟中，能使反應微孔內的溫度較快地達到所要求的高度，以滿足測定要求。其次，目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實驗室使用時對所提供的濃縮液稀釋配制，因此稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應保證質量。
此外，當試劑盒以OPD為底物時，則底物溶液應在反應顯色前臨時配制。
1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩，避免起泡。
2. 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。
3. 一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線，做好復孔。
5. 如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數。
6. 在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配制，不能混淆。
7. 底物請避光保存。
8. 不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。
植物ＥＬＩＳＡ試劑盒試驗的原理好像很簡單，不外乎固定抗原，增加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗刷和關閉。然而，即使是平鋪直敘的洗刷和關閉，假如做得不太好，也有或許毀了全部試驗。在試驗結束時，咱們是否能獲得有意義的信息，這在很大程度上取決于成果的信噪比。布景噪音會影響您對成果的判別。
洗刷很主要
洗刷過程看似很無聊，本來很主要，由于假如未聯系的資料(如非特異聯系的抗體或檢查試劑)殘留在微孔板中，那么它會增加布景噪音。如有必要，可增加洗刷液中的鹽濃度，這會阻止非特異聯系反應。假如布景過高，而您置疑洗刷不行時，能夠測驗增加洗刷次數。
關閉更關鍵
關閉液的作用是讓不相關的蛋白占有微孔板中潛在的聯系位點。這就下降了可發作信號的抗體非特異聯系的時機。您當然也期望抗體只與意圖蛋白聯系吧。假如您的布景過高，置疑關閉不充分，那么您能夠測驗運用更高濃度的關閉液，或恰當延伸關閉時刻。
假如您一直被布景疑問所困擾，ELISA試劑盒那么或許您該花些時刻來優化關閉液。這或許需求時刻，但也是值得的。現在主要有兩種類型的關閉液：蛋白和非離子型去污劑。您運用的類型須取決于多個要素，包含微孔板的外表試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢查試劑。好的關閉液應下降非特異性聯系，但它不應當與抗原、抗體或檢查試劑發作相互作用。
常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種關閉液、安穩，在去掉洗刷過程中的一些非特異聯系上很有用。但它們只在存在時起作用，由于很簡單被洗掉。因而一切洗刷液中也有必要增加關閉液。請勿運用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%)，它會下降特異聯系，發作假陰性。另一個挑選是運用蛋白和非離子型去污劑這兩種關閉液，后者可協助洗刷過程中的關閉。
蛋白關閉液則有所不一樣，是持久的。它們與開放位點聯系并關閉，同時安穩與微孔板聯系的抗原分子。常用的蛋白關閉液包含牛血清白蛋白(BSA)、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。血清組分的內涵多樣性可使它有用阻攔很多不一樣類型的分子相互作用。不過，它的缺點在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。處理這個疑問的一種辦法是運用雞或魚的正常血清。
抗體濃度須優化
咱們通常會留下來的操作過程，但是假如試劑稍有不一樣，則或許需求優化抗體的量。記住，非特異的抗體聯系會增加布景。為了避免這一點，切勿運用過多的一抗或二抗。
檢查試劑要適量
另一點也很清楚明了：切勿運用過多的檢查試劑。假如濃度過高，或許未準確稀釋，則會導致高布景。也不要顯色過度，如有必要，優化一下何時應參加停止液。
假如您的植物ＥＬＩＳＡ試劑盒意外地遇到了高布景，那么也無需太憂慮，順次檢查ELISA體系中的組分，并掃除或許存在的疑問。盡心優化，信任很快就會有美麗的成果。
因此，在ELISA測定中試劑的準備為關鍵的是，在實驗開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20min以上后，再進行測定，以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的，主要是為了在后面的溫育反應步驟中，能使反應微孔內的溫度較快地達到所要求的高度，以滿足測定要求。其次，目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實驗室使用時對所提供的濃縮液稀釋配制，因此稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應保證質量。
此外，當試劑盒以OPD為底物時，則底物溶液應在反應顯色前臨時配制。
1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩，避免起泡。
2. 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。
3. 一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線，做好復孔。
5. 如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數。
6. 在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配制，不能混淆。
7. 底物請避光保存。
8. 不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。
植物ＥＬＩＳＡ試劑盒試驗的原理好像很簡單，不外乎固定抗原，增加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗刷和關閉。然而，即使是平鋪直敘的洗刷和關閉，假如做得不太好，也有或許毀了全部試驗。在試驗結束時，咱們是否能獲得有意義的信息，這在很大程度上取決于成果的信噪比。布景噪音會影響您對成果的判別。
洗刷很主要
洗刷過程看似很無聊，本來很主要，由于假如未聯系的資料(如非特異聯系的抗體或檢查試劑)殘留在微孔板中，那么它會增加布景噪音。如有必要，可增加洗刷液中的鹽濃度，這會阻止非特異聯系反應。假如布景過高，而您置疑洗刷不行時，能夠測驗增加洗刷次數。
關閉更關鍵
關閉液的作用是讓不相關的蛋白占有微孔板中潛在的聯系位點。這就下降了可發作信號的抗體非特異聯系的時機。您當然也期望抗體只與意圖蛋白聯系吧。假如您的布景過高，置疑關閉不充分，那么您能夠測驗運用更高濃度的關閉液，或恰當延伸關閉時刻。
假如您一直被布景疑問所困擾，ELISA試劑盒那么或許您該花些時刻來優化關閉液。這或許需求時刻，但也是值得的。現在主要有兩種類型的關閉液：蛋白和非離子型去污劑。您運用的類型須取決于多個要素，包含微孔板的外表試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢查試劑。好的關閉液應下降非特異性聯系，但它不應當與抗原、抗體或檢查試劑發作相互作用。
常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種關閉液、安穩，在去掉洗刷過程中的一些非特異聯系上很有用。但它們只在存在時起作用，由于很簡單被洗掉。因而一切洗刷液中也有必要增加關閉液。請勿運用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%)，它會下降特異聯系，發作假陰性。另一個挑選是運用蛋白和非離子型去污劑這兩種關閉液，后者可協助洗刷過程中的關閉。
蛋白關閉液則有所不一樣，是持久的。它們與開放位點聯系并關閉，同時安穩與微孔板聯系的抗原分子。常用的蛋白關閉液包含牛血清白蛋白(BSA)、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。血清組分的內涵多樣性可使它有用阻攔很多不一樣類型的分子相互作用。不過，它的缺點在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。處理這個疑問的一種辦法是運用雞或魚的正常血清。
抗體濃度須優化
咱們通常會留下來的操作過程，但是假如試劑稍有不一樣，則或許需求優化抗體的量。記住，非特異的抗體聯系會增加布景。為了避免這一點，切勿運用過多的一抗或二抗。
檢查試劑要適量
另一點也很清楚明了：切勿運用過多的檢查試劑。假如濃度過高，或許未準確稀釋，則會導致高布景。也不要顯色過度，如有必要，優化一下何時應參加停止液。
假如您的植物ＥＬＩＳＡ試劑盒意外地遇到了高布景，那么也無需太憂慮，順次檢查ELISA體系中的組分，并掃除或許存在的疑問。盡心優化，信任很快就會有美麗的成果。
