BT-549細(xì)胞，細(xì)胞株培養(yǎng)
發(fā)布時(shí)間：2016-05-04瀏覽次數(shù)：927返回列表
產(chǎn)品名稱：BT-549細(xì)胞，細(xì)胞株培養(yǎng)
中文名稱：人胚腎細(xì)胞；表達(dá)SV40T抗原人胚腎上皮細(xì)胞
規(guī)格：25T
形態(tài)特性：圓形
生長特性：懸浮生長
特征特性：該細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)SV40大T抗原，并且促進(jìn)適病毒產(chǎn)物的產(chǎn)生。
培養(yǎng)條件：DMEM(HG)+500ug/mlG418+10%FBS
傳代方法：1：2傳代
庫存狀態(tài)：素爾現(xiàn)貨
上海素爾生物提供400多種類細(xì)胞株細(xì)胞系，質(zhì)量穩(wěn)定，價(jià)格優(yōu)惠，傳代次數(shù)少，細(xì)胞狀態(tài)良好，飽滿，有光澤，提供多項(xiàng)細(xì)胞復(fù)蘇服務(wù)，原代細(xì)胞和耐藥株的建立，細(xì)胞染色，STR分型鑒定。囊括歸納：1.細(xì)胞培養(yǎng)（代養(yǎng)細(xì)胞） 2.整體課題中細(xì)胞培養(yǎng) 3.MTT(1-48) 4.MTT(49-72) 5.MTT(73-96) 6.細(xì)胞凋亡檢測(cè)(普通) 7.細(xì)胞凋亡檢測(cè)(細(xì)胞有綠色熒光) 8.細(xì)胞周期檢測(cè) 9.質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 10.平板克隆形成 11.細(xì)胞劃痕 12.transwell 13.transwell侵襲 14.ROS活性氧檢測(cè) 15.線粒體膜電位檢測(cè)。
BT-549細(xì)胞，細(xì)胞株培養(yǎng)，如需要訂購，請(qǐng)?zhí)峁┵F單位名稱、發(fā)票抬頭、收貨地址、正確郵編號(hào)，聯(lián)系方式： QQ： 張昕
具體操作
一. 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
1.將水浴鍋預(yù)熱至37℃
2.用75％酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺(tái)臺(tái)面。
3.在超凈工作臺(tái)中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等等。
二．取出凍存管：
1.根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號(hào)。
2.從液氮罐中取出細(xì)胞盒，取出所需的細(xì)胞，同時(shí)核對(duì)管外的編號(hào)。
三．迅速解凍：
1.迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍，并要不斷的搖動(dòng)，使管中的液體迅速融化。
2.約1-2min后凍存管內(nèi)液體完全溶解，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁，再拿入超凈臺(tái)內(nèi)。
四.平衡離心：用架盤天平平衡后，放入離心機(jī)中3000r/min 離心3min
五.制備細(xì)胞懸液：
1.吸棄上清液。
2.向離心管內(nèi)加入10ml培養(yǎng)液，吹打制成細(xì)胞懸液。
六.細(xì)胞計(jì)數(shù)：細(xì)胞濃度以5×105/ml為宜。
七.培養(yǎng)細(xì)胞將復(fù)合細(xì)胞計(jì)數(shù)要求的細(xì)胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶內(nèi)，將培養(yǎng)瓶放入37℃和5％CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)2-4小時(shí)（或者24-48小時(shí)）后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)，換液的時(shí)間由細(xì)胞情況而定。
初學(xué)者易犯錯(cuò)誤：
1水浴鍋未預(yù)熱或者未預(yù)熱到37℃。
2.水浴鍋內(nèi)凍存管太多，導(dǎo)致傳熱不佳，使融化時(shí)間延長。
3.離心前忘記平衡，導(dǎo)致離心機(jī)損壞和細(xì)胞丟失。
4.一次復(fù)蘇細(xì)胞過多，忘記更換吸頭和吸管，導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染。
（另：冷凍細(xì)胞解凍程序）
2.1. 依據(jù)細(xì)胞株數(shù)據(jù)單之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它之成份和比例， 制備培養(yǎng)基。大多數(shù)之細(xì)胞均無法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之血清種類， 若因?qū)嶒?yàn)需要， 必須有所不同時(shí)， 務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成， 確定細(xì)胞適應(yīng)后， 方進(jìn)行所需之實(shí)驗(yàn)。
2.2. FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 馬血清)，對(duì)細(xì)胞而言差異大，請(qǐng)務(wù)必依據(jù)細(xì)胞株資料單之血清種類培養(yǎng)之。
2.3. 將培養(yǎng)基置于 37 °C水槽中回溫，回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之， 移入無菌操作臺(tái)內(nèi)。取出冷凍管， 立即放入37 °C 水槽中快速解凍， 水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿， 否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化后， 以70 % ethanol 擦拭冷凍管外部， 移入無菌操作臺(tái)內(nèi)。
2.4. 依據(jù)細(xì)胞種類和濃度，于無菌操作臺(tái)內(nèi)取 10 ml培養(yǎng)基加至 T25或 T75 flask中。取出已解凍之細(xì)胞懸浮液，緩緩加入T25 或T75 flask 內(nèi)之培養(yǎng)基， 混 合均勻，放入37 °C，5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
2.5. 對(duì)大多數(shù)細(xì)胞而言，1 % 以下之冷凍保護(hù)劑DMSO，不會(huì)對(duì)細(xì)胞之貼附或活化有不良影響，不需立刻由解凍細(xì)胞中去除，待第二天確定細(xì)胞生長或貼附良好后再去除即可。唯對(duì)少數(shù)因?qū)?span lang="EN-US">DMSO 敏感或會(huì)造成細(xì)胞分化之細(xì)胞，需立即去除DMSO 者， 則可將解凍后之細(xì)胞懸浮液放入5 - 10 ml 培養(yǎng)基中,離心300 xg (約1000 rpm)，5 分鐘，小心移去上清液，加入適量新鮮培養(yǎng)基，將細(xì)胞均勻混合后， 轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中， 再放入37 °C， 5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。收到T25 flask 細(xì)胞時(shí)， 處理方式為︰
1. 于寄送過程中，為避免起泡造成細(xì)胞脫落死亡，T25 flask 均加滿培養(yǎng)基。請(qǐng)檢查flask 外觀，并于顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀況和有無污染現(xiàn)象，若有任何問題， 不要打開蓋子，請(qǐng)立即通知細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室。
2. 將原封之T25 flask 靜置于37 °C， 5 % CO2 培養(yǎng)箱中，使細(xì)胞回溫至37 °C， 并讓運(yùn)送過程中少數(shù)脫落的細(xì)胞可再附著生長。隔天后，于無菌操作箱內(nèi)取出flask內(nèi)之培養(yǎng)基，(取出之培養(yǎng)基可以再使用)，僅留約5-10ml 培養(yǎng)基于flask 內(nèi)，依 一般培養(yǎng)方式再將細(xì)胞置入培養(yǎng)箱中或細(xì)胞已長滿盤， 則將細(xì)胞做傳代培養(yǎng)。
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