769-P細(xì)胞，細(xì)胞株培養(yǎng)
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胞內(nèi)出現(xiàn)顆粒或空泡。
細(xì)胞內(nèi)如果出現(xiàn)顆粒物質(zhì)，表明細(xì)胞處于非健康狀態(tài)。
同樣，細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)空泡也說(shuō)明細(xì)胞處于非健康狀態(tài)。
產(chǎn)生空泡可能是老化或是細(xì)胞狀態(tài)不好。
如果發(fā)生在單層細(xì)胞：一個(gè)具有雙折射性的正常細(xì)胞逐步失去這一特征（相差顯微鏡下細(xì)胞邊緣成暈環(huán)），則提示該細(xì)胞已經(jīng)死亡，即終干枯死亡。
如果發(fā)生在懸浮細(xì)胞：正常懸浮細(xì)胞清晰透明，如胞內(nèi)出現(xiàn)顆粒或變渾濁表明細(xì)胞受損，甚至死亡。
怎樣去除死細(xì)胞？單層培養(yǎng)的細(xì)胞死亡后，一般會(huì)漂浮起來(lái)，因此不需要特殊處理。
而懸浮細(xì)胞或原代培養(yǎng)細(xì)胞則要通過(guò)密度離心（如Ficoll梯度）方法收集死細(xì)胞。
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769-P細(xì)胞，細(xì)胞株培養(yǎng)細(xì)胞復(fù)蘇的原則－快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃，使細(xì)胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶，對(duì)細(xì)胞造成損害。
貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
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