143B細胞，細胞株培養
發布時間：2016-05-04瀏覽次數：876返回列表
胞內出現顆粒或空泡。
細胞內如果出現顆粒物質，表明細胞處于非健康狀態。
同樣，細胞內出現空泡也說明細胞處于非健康狀態。
產生空泡可能是老化或是細胞狀態不好。
如果發生在單層細胞：一個具有雙折射性的正常細胞逐步失去這一特征（相差顯微鏡下細胞邊緣成暈環），則提示該細胞已經死亡，即終干枯死亡。
如果發生在懸浮細胞：正常懸浮細胞清晰透明，如胞內出現顆粒或變渾濁表明細胞受損，甚至死亡。
怎樣去除死細胞？單層培養的細胞死亡后，一般會漂浮起來，因此不需要特殊處理。
而懸浮細胞或原代培養細胞則要通過密度離心（如Ficoll梯度）方法收集死細胞。
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143B細胞，細胞株培養細胞復蘇的原則－快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶，對細胞造成損害。
貼壁細胞傳代：提前將培養基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內，吸除或倒掉細胞瓶內舊培養液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液。控制吹打的力度，避免產生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養基，置37℃溫箱培養，隔天觀察貼壁生長情況。
懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉移到無菌離心管內，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養基，置37℃溫箱培養。
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