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培養(yǎng)基滅菌的要求與方法探究

發(fā)布時間:2023-09-25瀏覽次數(shù):884返回列表

     培養(yǎng)基(Medium)是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料,一般都含有水、氮源、無機(jī)鹽(包括微量元素)、碳源、生長因子(維生素、氨基酸、堿基、抗菌素、色素、激素和血清等)等。 

     培養(yǎng)基由于配制的原料不同,使用要求不同,而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后,易被細(xì)菌污染或分解變質(zhì),因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴(yán)格滅菌的培養(yǎng)基(如組織培養(yǎng)基),較長時間的貯存,必須放在3-6℃的冰箱內(nèi)。由于液體培養(yǎng)基不易長期保管,均改制成粉末。培養(yǎng)基由于富含營養(yǎng)物質(zhì),易被污染或變質(zhì)。配好后不宜久置,好現(xiàn)配現(xiàn)用。培養(yǎng)基配成后一般需測試并調(diào)節(jié)pH,還須進(jìn)行滅菌,通常有高溫滅菌和過濾滅菌。

    滅菌(sterilization)是指用物理或化學(xué)的方法殺滅全部微生物,包括致病和非致病微生物以及芽孢,使之達(dá)到無菌保障水平。經(jīng)過滅菌處理后,未被污染的物品,稱無菌物品。經(jīng)過滅菌處理后,未被污染的區(qū)域,稱為無菌區(qū)域。

    在發(fā)酵過程中,培養(yǎng)基滅菌主要有以下幾個原因:如不滅菌,會使生物反應(yīng)的基質(zhì)或產(chǎn)物,因雜菌的消耗而損失,造成能力的下降;雜菌也會產(chǎn)生代謝產(chǎn)物,這就使產(chǎn)物的提取加困難,造成得率降低,產(chǎn)品質(zhì)量下降;雜菌大量繁殖后,會改變反應(yīng)液的pH值,使反應(yīng)異常;有些雜菌會分解產(chǎn)物,使失敗;如果發(fā)生噬菌體污染,菌細(xì)胞將被裂解,使失敗。常見的五種滅菌方法如下:

一、化學(xué)物質(zhì)滅菌

  原理:藥物與微生物細(xì)胞中的成分反應(yīng),使蛋白質(zhì)變性酶失活。使用范圍:器皿、雙手和實驗室、無菌室的環(huán)境滅菌,不能用于培養(yǎng)基滅菌。

  常用的滅菌劑:甲醛 37%  戊二醛 2%  高錳酸鉀 0.1%-0.25%   苯酚 0.1%-0.15%

  漂 5%   過氧乙酸 0.02%-0.2%  酒精 75%   焦碳酸二乙酯 0.01%-0.1%  煤酚皂(來蘇爾) 1%—5%

二、干熱滅菌

  滅菌原理是利用高溫對微生物有氧化、蛋白質(zhì)變性和電解質(zhì)濃縮作用而殺滅微生物。常用灼燒和電熱箱加熱,140-180℃ 1-2小時。適于對玻璃及金屬用具及沙土管滅菌。

 

三、濕熱滅菌

  滅菌原理是直接用蒸汽滅菌,蒸汽在冷凝時能釋放出大量潛熱,蒸汽具有強(qiáng)大的穿透力,破壞菌體蛋白和核酸的化學(xué)鍵,使酶失活,微生物因代謝障礙而死亡。水煮常壓滅菌:100℃?;蝻柡驼羝麥缇阂话?21℃,30分鐘。適合培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備滅菌。

 

四、輻射滅菌

  輻射滅菌的原理是利用高能量的電磁輻射與菌體核酸的光化學(xué)反應(yīng)造成菌體死亡。常用的有紫外線、X射線和γ射線。用于室內(nèi)空氣及器皿表面滅菌。

 

五、過濾除菌

  除菌原理是利用微生物不能透過濾膜除菌。方法是使用0.01~0.45 mm孔徑濾膜,用于壓縮空氣、酶溶液及其他不耐熱化合物溶液除菌。

  在工業(yè)中,對于培養(yǎng)基、管道、設(shè)備的滅菌,通常采用蒸汽加熱到一定的溫度,并保溫一段時間的滅菌方法,稱之為濕熱滅菌。濕熱滅菌的顯著優(yōu)點是:使用方便,無污染,而且其冷凝水可以直接冷凝在培養(yǎng)基中,也可以通過管道排出。

培養(yǎng)基滅菌大多數(shù)用濕熱滅菌。衡量熱滅菌的指標(biāo)很多,常用的是“熱死時間",即在限定的溫度下殺死原有微生物中一定比例所需的持續(xù)時間。影響熱滅菌的溫度和時間的因素很多,包括:微生物種類、性質(zhì)、濃度和培養(yǎng)基的性質(zhì)、濃度等。

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