高效液相色譜（HPLC）使用過程疑難解答
發布時間：2021-11-09瀏覽次數：3156返回列表
高效液相色譜（High Performance Liquid Chromatography）高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。下面就HPLC使用過程的常出現問題及解答。
一、問：液相色譜中峰出現拖尾或出現雙峰的原因是什么？
答：1.篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或換柱子。
2.存在干擾峰，解決辦法為使用較長的柱子，改換流動相或換選擇性好的柱子
二、問：用HPLC進行分析時保留時間有時發生漂移，有時發生快速變化，原因何在？如何解決？
答：關于漂移問題：
1.溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定
2.流動相發生變化，解決辦法是防止流動相發生蒸發、反應等
3.柱子未平衡好，需對柱子進行長時間的平衡
關于快速變化問題
1.流速發生變化，解決辦法是重新設定流速，使之保持穩定
2.泵中有氣泡，可通過排氣等操作將氣泡趕出。
3.流動相不合適，解決辦法為改換流動相或使流動相在控制室內進行適當混合
三、問：HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法
答：
1.樣品量不足，解決辦法為增加樣品量 醫.學教育網搜集整理
2.樣品未從柱子中流出。可根據樣品的化學性質改變流動相或柱子
3.樣品與檢測器不匹配。根據樣品化學性質調整波長或改換檢測器
4.檢測器衰減太多。調整衰減即可。
5.檢測器時間常數太大。解決辦法為降低時間參數
6.檢測器池窗污染。解決辦法為清洗池窗。
7.檢測池中有氣泡。解決辦法為排氣。
8.記錄儀測壓范圍不當。調整電壓范圍即可。
9.流動相流量不合適。調整流速即可。
10.檢測器與記錄儀超出校正曲線。解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線。
四、問：我購買的HPLC柱驗收測試時柱壓過高，請問為什么？
答：柱壓過高是HPLC柱用戶-常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，您可按下面步驟檢查問題的起因。
1.拆去保護預柱，看柱壓是否還高，否則是保護柱的問題，若柱壓仍高，再檢查；
2.把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查；
3.將柱子的進出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動相沖洗柱子，（此時不要連接檢測器，以防固體顆粒進入流動池）。這時，如果柱壓仍不下降，再檢查；
4.換柱子入口篩板，若柱壓下降，說明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質，正是這些雜質將篩板堵塞引起壓力上升。
五、問：做HPLC分析時，柱壓不穩定，原因何在？如何解決？
答：原因可能有：
1.泵內有空氣，解決的辦法是清除泵內空氣，對溶劑進行脫氣處理；
2.比例閥失效，換比例閥即可；
3.泵密封墊損壞，換密封墊即可；
4.溶劑中的氣泡，解決的辦法是對溶劑脫氣，必要時改變脫氣方法；
5.系統檢漏，找出漏點，密封即可；
6.梯度洗脫，這時壓力波動是正常的。
