腫瘤是威脅人類健康的重大疾病, 腫瘤藥物遞送系統的研發已成為目前醫藥領域的熱點方向
發布時間：2018-09-21瀏覽次數：1471返回列表
摘要 使用基因轉運載體運載腫瘤細胞進行轉染是基因治療的關鍵環節之一。Lipofectamine 2000和DOTAP作為商品轉染試劑, 具有較高的轉染效率。為了進一步發掘其作為基因轉運載體的應用潛力, 該文研究了Lipofectamine 2000和DOTAP的粒徑、Zeta電位及形態, 并分別與綠色熒光蛋白基因(pGFP-N2)、熒光素酶基因(pGL3)結合, 形成脂質體/DNA復合物, 通過載入人喉癌細胞(Hep-2)和人肺癌細胞(NCI-H460), 考察了其轉染效率和細胞毒性。結果表明, 脂質體 Lipofectamine 2000與DOTAP都能有效壓縮DNA, 形成復合物。Lipofectamine 2000與DOTAP相比, 轉染效率高, 與DNAzui佳轉染比例范圍為2:1-4:1。毒性實驗顯示, 在N/P大于3/1時, Lipofectamine 2000與DOTAP對癌細胞具有一定的細胞毒性。細胞種類對脂質體的轉染效率有很大影響, Lipofectamine 2000對Hep-2細胞的轉染效率比NCI-H460高。
腫瘤是威脅人類健康的重大疾病, 腫瘤藥物遞送系統的研發已成為目前醫藥領域的熱點方向。陽離子脂質體是一種非病毒基因載體, 具有類細胞結構和生物膜的特性, 在體內可降解, 可以保護其運載基因片段的生物活性, 而且操作簡單, 重復性好, 是一種有臨床應用潛力的抗腫瘤藥物遞藥系統之一。 Lipofectamine 2000是一種常用的陽離子脂質體轉染試劑, 它由幾種陽離子類脂組成, 在多種細胞系中具有高的轉染效率和較高水平的重組蛋白表達, 在轉染腫瘤細胞的研究中已有很多報道。DOTAP 是由單陽離子-N,N,N-三甲胺丙烷甲基硫酸鹽以 1 mg/mL的濃度在無菌水中制備而成的, 是典型的商品化陽離子類脂, 其三維結構模型如圖1所示。 DOTAP轉染DNA包括酵母人工染色體, 在有無血清的情況下, 均可穩定地表達基因。另外, DOTAP還適合轉染寡核苷酸、核酸、核苷酸、核糖體蛋白復合物和蛋白質。大多數情況下, 在無血清條件下能得到較高的轉染率。因此, 人們常用它們作為對照轉染試劑應用于體內和體外, 大大降低了實驗成本。
本文研究了陽離子脂質體Lipofectamine 2000、 DOTAP的尺寸、形態、結構及與DNA在不同比例下結合形成復合物, 對Hep-2和NCI-H460細胞的轉染效率及毒性的影響, 優化兩種試劑的使用條件, 考察細胞種類對兩種脂質體基因轉染效率的影響。通過本研究, 可為轉染腫瘤細胞載體的選擇提供依據, 為陽離子類脂的合成及生物學評價實驗提供依據和理論參考, 并進一步挖掘常用轉染試劑的應用潛力。
腫瘤是威脅人類健康的重大疾病, 腫瘤藥物遞送系統的研發已成為目前醫藥領域的熱點方向。陽離子脂質體是一種非病毒基因載體, 具有類細胞結構和生物膜的特性, 在體內可降解, 可以保護其運載基因片段的生物活性, 而且操作簡單, 重復性好, 是一種有臨床應用潛力的抗腫瘤藥物遞藥系統之一。 Lipofectamine 2000是一種常用的陽離子脂質體轉染試劑, 它由幾種陽離子類脂組成, 在多種細胞系中具有高的轉染效率和較高水平的重組蛋白表達, 在轉染腫瘤細胞的研究中已有很多報道。DOTAP 是由單陽離子-N,N,N-三甲胺丙烷甲基硫酸鹽以 1 mg/mL的濃度在無菌水中制備而成的, 是典型的商品化陽離子類脂, 其三維結構模型如圖1所示。 DOTAP轉染DNA包括酵母人工染色體, 在有無血清的情況下, 均可穩定地表達基因。另外, DOTAP還適合轉染寡核苷酸、核酸、核苷酸、核糖體蛋白復合物和蛋白質。大多數情況下, 在無血清條件下能得到較高的轉染率。因此, 人們常用它們作為對照轉染試劑應用于體內和體外, 大大降低了實驗成本。
本文研究了陽離子脂質體Lipofectamine 2000、 DOTAP的尺寸、形態、結構及與DNA在不同比例下結合形成復合物, 對Hep-2和NCI-H460細胞的轉染效率及毒性的影響, 優化兩種試劑的使用條件, 考察細胞種類對兩種脂質體基因轉染效率的影響。通過本研究, 可為轉染腫瘤細胞載體的選擇提供依據, 為陽離子類脂的合成及生物學評價實驗提供依據和理論參考, 并進一步挖掘常用轉染試劑的應用潛力。
