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熒光定量PCR講使用中的一些小技巧
發布時間:2013-12-25瀏覽次數:1158返回列表
下面就詳細講講熒光定量PCR使用中的一些小技巧
先介紹熒光定量PCR原理:在PCR產物或引物中用dU 代替dT。UNG對不含dU的模板無任何影響。UNG可從單或雙鏈DNA中消除尿嘧啶,而對RNA中的尿嘧啶和單一尿嘧啶分子則無任何作用。
它可以去除任何來源的污染;UNG處理可以和PCR擴增在同一個反應管內進行;由于擴增產物中有大量dU存在,可徹底消除污染源。
在使用過程中特別提醒:
1.要仔細閱讀儀器使用說明書,這樣可以充分發揮儀器的性能并避免發生錯誤
2.程序設計完成后,一定要仔細檢查,以免出錯造成損失
3.常用的程序調用以前使用過的正確程序文件
4.樣品量較小時,在樣品槽的兩邊各加上兩排8聯管,這樣可使熱蓋平整,加熱效果好,有利于效果的穩定性
5.在進行各種試劑加樣時,相同的試劑要一起加后再分裝,要用同一只吸液器及同一個槍頭
6.加樣完成后,用酶聯板離心轉頭將管離心一下,使反應液到管底,因為反應液在管壁或管蓋上時,會嚴重影響實驗結果。


