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梯度PCR儀設置梯度問題
發布時間:2013-12-03瀏覽次數:992返回列表

梯度PCR在變性、延伸均可設置梯度,那么如果在摸條件時三步均設置梯度?
1.梯度PCR儀只是方便你尋找佳PCR退火溫度,可能減少你做PCR的次數和時間。使用時和樓上的兄弟說的一樣,但有一點需要說明一下,就是你所設的溫度梯度并不能象樓上的兄弟所說的那么簡單,設溫度梯度時,行的溫度是需要一個簡單計算的。
舉例說明:比如一個12X8的96孔板,如果一共可設12個溫度梯度,也就是說每8個孔是一個溫度。你所設的初始溫度是56度,你設的溫度梯度是14,那你每一排的溫度相差就是14/12。以些類推。
2.一個很實用且簡單的方法就是你將你所設計的引物我PCR產物放到Oligo中去評價,它會給你一個佳的退火溫度和循環參數,這個溫度實際上就和你通過梯度PCR摸索出來的退火溫度幾乎是一樣的。
3.以我的經驗就直接用軟件給出的退火溫度就沒有問題。


