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非洲豬瘟檢測PCR實驗室的設(shè)計原則
發(fā)布時間:2019-07-22瀏覽次數(shù):2122返回列表
PCR實驗室原則上為試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品制備區(qū)、擴增區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū)四個單獨的工作區(qū)域并設(shè)有專用走廊,各工作區(qū)域應(yīng)設(shè)緩沖間,工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置。不同功能的工作區(qū)應(yīng)是分隔的,各工作區(qū)有明顯的標(biāo)志,不能直通,如果緊密相連,需安裝物品傳遞窗。前兩區(qū)為擴增前區(qū),后兩區(qū)為擴增后區(qū),擴增前區(qū)與擴增后區(qū)應(yīng)嚴格分開。實驗材料、試劑、記錄紙、筆、清潔材料等,只能從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū),即從試劑準(zhǔn)備區(qū)→樣品制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū),不得逆向流動。實驗室的氣流也應(yīng)從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū),不得逆向流動。各工作區(qū)頂部應(yīng)安裝紫外燈,紫外燈的波長為254nm,每20㎡一支40W的紫外燈。
非洲豬瘟檢測PCR實驗室的設(shè)計原則:
1、非洲豬瘟檢測實驗室的選址
符合檢測實驗室的相關(guān)規(guī)定,具體適用于屠宰場來說,可選擇辦公樓或者的實驗室空間,選址不能和屠宰線相通,如果實驗室陽性對照污染,會污染整個屠宰生產(chǎn)線,勢必對屠宰場造成巨大的經(jīng)濟損失。
個別不專業(yè)的實驗室設(shè)計建造公司因為不了解非洲豬瘟檢測實驗室的檢測流程,造成設(shè)計布局不合理,對后期開展工作造成很大的不便及生物安全隱患。
2、主體結(jié)構(gòu)
目前實驗室的主體多為彩鋼板、鋁合金型材。室內(nèi)所有陰角、陽角均采用鋁合金R50內(nèi)角鋁,從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問題。并且彩鋼板結(jié)構(gòu)牢固,線條簡明,美觀大方,密封性好。
3、標(biāo)準(zhǔn)的四區(qū)分隔和氣壓調(diào)節(jié)
將PCR過程分成試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本制備和PCR擴增區(qū)及產(chǎn)物分析檢測區(qū)四個的實驗區(qū)。整個區(qū)域有一個整體緩沖走廊。每個實驗區(qū)設(shè)置有緩沖區(qū),同時各區(qū)通過氣壓調(diào)節(jié),使整個PCR實驗過程中試劑和標(biāo)本免受氣溶膠的污染并降低擴增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染。
另外:
PCR實驗室根據(jù)使用儀器的功能合理設(shè)置各個工作區(qū)域,如采用聚合酶聯(lián)反應(yīng):則設(shè)置試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)四個單獨的工作區(qū)域,這是常用的分區(qū)方式。樣品需要粉碎處理的,還需增設(shè)樣品粉碎區(qū);若使用實時熒光PCR法:基因擴增區(qū)、基因產(chǎn)物分析區(qū)可以合并在一個房間內(nèi);采用標(biāo)本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的全自動化PCR分析儀,則標(biāo)本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并為一個區(qū)域,因此PCR實驗室原則上設(shè)置五個區(qū)或四個區(qū)或三個區(qū)或二個單獨的工作區(qū)。
核酸擴增前區(qū)和核酸擴增后區(qū)可設(shè)在一個房間內(nèi),但必須在滿足下列要求的前提下:
a.核酸擴增前區(qū)實驗室內(nèi)設(shè)置兩個不同位置的實驗區(qū),試劑配置在超凈工作臺中操作,樣品處理在生物安全柜內(nèi)操作。
b.在核酸擴增后區(qū)使用全封閉的擴增和檢測系統(tǒng),如實時熒光PCR儀等。
c.每個實驗人員使用各自的試劑、耗材、移液器和盛放污染物的盛器。
d.在實驗前后對操作區(qū)域和共享器具進行清潔及消毒。
e.各區(qū)域的試劑、器具、儀器和設(shè)備為該區(qū)專用,不得交叉使用。
4、非洲豬瘟檢測實驗室的布局
非洲豬瘟檢測實驗室用的儀器為熒光定量PCR,因此核酸擴增和分析在一個區(qū),實驗室設(shè)計需要如下功能房間:PCR緩存走廊、帶緩存間的配液室、帶緩存間的樣品處理室、帶緩存間的核酸擴增分析區(qū)及實驗室用具消毒室。
5、非洲豬瘟檢測實驗室生物安全保護
理論上講非洲豬瘟檢測實驗室是BSL-2生物安全實驗室,需要配置二級生物安全柜,推薦選擇70%外排,30%內(nèi)循環(huán),各功能房間緩存設(shè)置衣柜和消毒器,各區(qū)的實驗服專用,物料流通需要配置帶紫外線的互鎖的傳遞窗,實行人流物流分開設(shè)置。
6、非洲豬瘟檢測實驗室消毒
在三個實驗區(qū)和三個緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內(nèi)部安裝有紫外燈,供消毒用。
在試劑準(zhǔn)備區(qū)和標(biāo)本制備區(qū)還設(shè)置移動紫外線燈,對實驗桌進行局部消毒。
7、非洲豬瘟檢測實驗室機械連鎖不銹鋼傳遞窗
試劑和標(biāo)本通過機械連鎖不銹鋼(不建議使用電子連鎖方式)傳遞窗傳遞,保證試劑和標(biāo)本在傳遞過程中不受污染(人物分流)。
8、非洲豬瘟檢測實驗室地面
地面建議使用PVC卷材地面或自流坪地面,整體性好。便于進行清掃,耐腐蝕。沒有條件的也可采用水磨石地面,或大塊的瓷磚(至少800mm×800mm)接縫需要小于2mm。
9、非洲豬瘟檢測實驗室照明
燈具要選用凈化燈具,能達到便于清洗、不積塵的特點。
驗室各區(qū)功能及主要設(shè)備
1、試劑準(zhǔn)備區(qū):主要進行試劑的制備、分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運送至該區(qū),不得經(jīng)過其它區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的試劑。本區(qū)主要設(shè)備有天平、冰箱、離心機、加樣器、振蕩器等。
對于氣流壓力的控制,本區(qū)并沒有嚴格的要求。
2、樣品制備區(qū):主要進行樣品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應(yīng)管和測定DNA的合成。本區(qū)主要設(shè)備有冰箱、生物安全柜、離心機、加樣器、振蕩器、恒溫水浴等。
本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為正壓,以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。
3、擴增區(qū):主要進行DNA擴增。此外,已制備的DNA模板 (來自樣品制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑準(zhǔn)備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。本區(qū)主要設(shè)備有:擴增儀、冰箱、離心機、加樣器等。
本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。
4、擴增產(chǎn)物分析區(qū):擴增產(chǎn)物的測定。本區(qū)主要設(shè)備有酶標(biāo)儀、洗板機、加樣器和水浴箱等。
本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域。