- 產(chǎn)品目錄
- 品牌分類
PCR實驗室的核心問題是什么？
發(fā)布時間：2019-10-08瀏覽次數(shù)：2014返回列表
PCR實驗室原則上分為四個單獨的工作區(qū)域：試劑準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)。為避免交叉污染，進入各個工作區(qū)域必須嚴格遵循單一方向進行，從試劑準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增區(qū)→產(chǎn)物分析區(qū)單向流動。
實驗室空調(diào)通風系統(tǒng)設計及壓力控制是PCR實驗室的重中之重，雖然PCR實驗室沒有嚴格的空氣潔凈度要求，但是為避免各個功能區(qū)之間交叉污染的可能性，應采用送風、全送全排的氣流組織形式，并保證各功能區(qū)的壓力梯度要求。各功能區(qū)的壓力梯度要求如下：
試劑準備區(qū)主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應直接運送至該區(qū)，不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。
標本制備區(qū)主要進行的操作為樣本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為正壓，以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動。
擴增區(qū)，已制備的DNA模板 (來自樣本制備區(qū))的加入和主反應混合液(來自試劑制備區(qū))制備成反應混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內(nèi)進行。
產(chǎn)物分析區(qū)主要進行的操作為擴增片段的測定。本區(qū)是主要的擴增產(chǎn)物污染來源，因此對本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域。
PCR實驗室的核心問題是如何避免污染，由于一旦發(fā)生污染，實驗就必須停止，直到找到污染源為止，而且實驗結(jié)果必須作廢，需重新進行實驗。所以發(fā)生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣，浪費人力物力。PCR實驗室常見有擴增產(chǎn)物的污染；天然基因組DNA的污染；試劑的污染以及標本間的污染等。因此要避免污染，事前預防是關鍵。
專業(yè)的設計是避免污染的源頭，先應做到各個功能區(qū)域科學合理布置；各個功能區(qū)域要有明顯的標記(如醒目的門牌或不同的地面顏色等)，以避免各個不同實驗區(qū)域設備物品、試劑等發(fā)生混淆。
其次應具備合理的空調(diào)通風系統(tǒng)設置，盡量采用送風、全送全排的空調(diào)系統(tǒng)；嚴格的壓力梯度控制、緩沖、門開啟關閉互鎖，以確保“不串風”。
（本文內(nèi)容來源于網(wǎng)絡，如有侵權請聯(lián)系我們刪除）
