用戶關注非洲豬瘟檢測熒光定量PCR儀的哪些指標?
發布時間：2019-04-01瀏覽次數：2488返回列表
截止目前，共有28個省份先后發生111起非洲豬瘟疫情，生豬撲殺量達數萬，疫情形勢復雜嚴峻，給生豬養殖業帶來嚴重經濟損失!
網友談“豬”色變，到底啥是豬瘟?
顧名思義，“非洲豬瘟”早被發現并確診是在非洲的肯尼亞，隨后在安哥拉、南非、塞內加爾、蘇丹、贊比亞等非洲陸續有報道。1957年開始在非洲以外的傳播。
非洲豬瘟(African Swine Fever，ASF)是由非洲豬瘟病毒(Asfivirus，ASFV)引起的豬的一種急性、烈性、高度接觸性傳染病。該病嚴重危害著養豬業，動物衛生組織將其列為法定報告動物疫病之一。我國將非洲豬瘟列為一類動物疫病，是烈性外來疫病，其對生豬致病率高，致死率高達。
疫情籠罩，應該如何應對?
自2018年8月非洲豬瘟疫情在爆發以來，疫情已持續近6個月。日前，農業農村部印發《非洲豬瘟疫情應急實施方案(2019版)》。
眾所周知，接種疫苗是預防傳染病的有效手段。那么為什么不用疫苗防控非洲豬瘟呢?事實是目前外均沒有用于預防非洲豬瘟的安全有效疫苗。非洲豬瘟疫苗研發成功短期內很難實現。
農業農村部畜牧獸醫局有關負責人表示，諸多因素共同決定了非洲豬瘟防控工作的復雜性和長期性。
從有關處了解到，現在對于疫情區病豬，主要處理方式為撲殺，類似撥牙式消除病毒。一旦檢出陽性病豬，無論大小全部挖坑深埋或者立即焚燒，且嚴禁運出疫區。健康未染病豬需經嚴格檢測檢疫，合格后方能逃過一劫，繼續飼喂直到達標出售。那么問題來了，怎樣判斷生豬是否感染非洲豬瘟病毒?
非洲豬瘟如何檢測?
1. 免疫學檢測試紙條
2019年1月2日，農業農村部辦公廳發布關于非洲豬瘟病毒檢測試劑盒有關事宜的通知。通知規定可以使用農業農村部部批準或經動物疫病預防控制中心比對符合要求的檢測方法及檢測試劑盒(試紙條)進行豬瘟病毒檢測。
此法主要原理為抗體與抗原結合，形成免疫復合物，通過試紙條產生特定顏色變化來判斷樣本是否具有豬瘟病毒。當待檢樣品中沒有病毒抗體時，檢測線則不顯色，有病毒抗體時，產生顏色。
需要注意的是，試紙條檢測雖然操作方便、成本低廉、簡單快速，但敏感性不高，僅為70%，容易產生假陽性和假陰性，一旦漏檢，將導致嚴重后果，對于疫情的控制非常不利。農業農村部規定，符合要求的豬瘟病毒試紙條在應急期間可使用至2019年6月30日。顯然，試紙條只是緊急疫情下的權宜之計，其準確性并不能滿足實際檢測需求。
2. 常規PCR檢測
動物衛生與流行病學中心與動物疫病預防控制中心于去年8月編制了非洲豬瘟病毒檢測操作試行規程。該規程從分子生物學角度出發，針對非洲豬瘟病毒核酸進行檢測，主要方式為實時熒光PCR檢測和常規PCR檢測。
常規PCR檢測過程：待檢樣品通過DNA提取試劑盒提取DNA。反應液制備完成后，每管加入提取的3μL DNA樣本，進行PCR擴增。經過PCR擴增完成的產物進行瓊脂糖凝膠電泳。電泳結束后進行拍照觀察分析。此法擴增的ASFV VP72基因長度為257 bp。若被檢樣品電泳凝膠出現257 bp條帶，則判斷為ASFV陽性，否則，則視為陰性。
此檢測方法靈敏度較試紙條檢測高，兩個小時內便能出結果。但是進行常規PCR檢測需要配備PCR儀，相應的，也需要安全無污染的實驗室條件。另一方面，PCR擴增產物需要進行電泳和手動熒光成像，后肉眼判斷病毒基因是否具有擴增條帶，所以對檢測人員的專業水平要求較高。
3. 實時熒光PCR檢測
實時熒光PCR檢測過程：待檢樣品通過DNA提取試劑盒提取DNA。樣本制備完成后，進行熒光定量PCR擴增。Ct值由實時熒光PCR儀軟件自動確定。過程設置提取陽性對照(+)、提取陰性對照(-)、反應陽性對照(+)、反應陰性對照(-)4個對照。
相比常規PCR檢測，實時熒光PCR檢測法準確率高，可達97%。此法需要配置實時熒光PCR儀，這對中小型養殖場來說，是一筆不小的負擔：一方面實時熒光PCR儀市場售價為10萬~50萬，普通養殖場或檢測中心難以承此負擔；另一方面，實時熒光PCR儀操作需要專業的技術人員，通常操作人員為本科甚至碩士學歷，而普通養殖場很難招聘到該類技術人員。
需要注意的是，盡管花費較高，實時熒光PCR法仍是目前豬瘟病毒檢測使用率高的方法。
用戶關注非洲豬瘟檢測熒光定量PCR儀的哪些指標?
穩定性：穩定性包括數據穩定性，也指性能、指標穩定。穩定性低會導致數據結果可靠性下降，這對于疫情檢測，尤其是應對大批量樣本檢測來說，儀器穩定性至關重要。
熒光通道：傾向于采購多通道實時熒光PCR儀。
價格：對于大型養殖場來說，配備PCR儀資金不成問題。但中小型生豬養殖場及檢測機構由于經費受限，難以承擔高昂的儀器采購費用。據業內人士透露，在其他條件符合預期的情況下，他們愿意采購10萬以內PCR儀。
技術支持：這一點是各型養殖場的軟肋。由于檢測技術人員的嚴重缺失，各生豬養殖場亟需能夠幫助指導生豬檢測技術操作。若PCR儀廠商能夠提供專業的儀器使用指導及售后支持，這將會是一大賣點。
因此，價格明顯的國產實時熒光PCR儀將成為這些用戶的。為此，小編與知名國產PCR儀供應商力新儀器市場經理李勇求證，他的回答也印證了這一點。據他介紹，受此次非洲豬瘟事件的影響，實時熒光PCR儀的銷售增長顯著。
說非洲豬瘟檢測熒光定量PCR儀是應對豬瘟疫情的中流砥柱毫不為過。然而，即時、快速和準確的檢測是廣大養殖場和檢測機構對檢測儀器高的訴求。面對大規模爆發的烈性疫情，用戶對便攜、易操作、準確性高、成本相對低廉的檢測設備需求為迫切。換句話說，現有儀器解決方案在滿足非洲豬瘟病毒檢測需求方面還有提升空間。比如前端預埋試劑的微流控芯片搭配后端qPCR儀檢測，只要芯片價格能讓用戶負擔得起，將是一個很好的產品組合。事實上，以微流控芯片作為耗材，搭配后端定量PCR的檢測在臨床檢測領域已有成型產品。希望各大儀器廠商推出優檢測產品，為此次疫情平息出一份力。
