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北京萊普特PCR擴增儀的使用
發(fā)布時間：2017-05-15瀏覽次數(shù)：1912返回列表
導(dǎo)讀：北京萊普特PCR擴增儀被廣泛地運用在醫(yī)學(xué)和生物學(xué)的實驗室，例如用于判斷檢體中是否會表現(xiàn)某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷、基因復(fù)制，以及親子鑒定。知曉北京萊普特PCR擴增儀的使用原理才能好的操作它。
北京萊普特PCR擴增儀的工作原理
類似于DNA的天然復(fù)制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。
PCR由變性--退火--延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：
①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準備；
②模板DNA與引物的退火（復(fù)性）：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合；
③引物的延伸：DNA模板--引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA 鏈互補的半保留復(fù)制鏈重復(fù)循環(huán)變性--退火--延伸三過程，就可獲得多的“半保留復(fù)制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需2～4分鐘，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。到達平臺期（Plateau）所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。
北京萊普特PCR擴增儀操作步驟
1. 在0.2mlEppendorf管內(nèi)配制反應(yīng)體系：
2. 打開電源開關(guān)
3. 選擇new進入編程操作
4. 按下列程序進行編程： （1） 94℃預(yù)變性5min；（2） 94℃變性50sec； （2） 55℃退火50sec；（4） 72℃延伸10 sec；
5. （5）重復(fù)步驟②-④30次；（6） 72℃徹底延伸10min
6. 從file菜單中，調(diào)取程序；
7. 按回車鍵確認后，按照提示輸入相應(yīng)的配制反應(yīng)體系體系；
8. 啟動程序；
9. 程序結(jié)束后，取出Eppendorf管。
10. 電泳檢測PCR結(jié)果。
北京萊普特PCR擴增儀保養(yǎng)
1．樣品池的清洗先打開蓋子，然后用95%乙醇或10%清洗液浸泡樣品池5min，然后清洗被污染的孔；用微量移液器吸取液體，用棉簽吸干剩余液體；打開PCR儀，設(shè)定保持溫度為50℃的PCR程序并使之運行，讓殘余液體揮發(fā)去除。一般5～10min即可。
2．熱蓋的清洗對于熒光定量PCR儀，當有熒光污染出現(xiàn)，而且這一污染并非來自樣品池時，或當有污染或殘跡物影響到熱蓋的松緊時，需要用壓縮空氣或純水清洗墊蓋底面，確保樣品池的孔干凈，無污物阻擋光路。
3．儀器外表面的清洗清洗儀器的外表面可以除去灰塵和油脂，但達不到消毒的效果。選擇沒有腐蝕性的清洗劑對PCR儀的外表面進行清洗。
4．換保險絲先將PCR儀關(guān)機，拔去插頭，打開電源插口旁邊的保險盒，換上備用的保險絲，觀察是否恢復(fù)正常。
