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凝膠成像系統(tǒng)具體可以用于哪些實(shí)驗(yàn)分析？
發(fā)布時(shí)間：2018-09-25瀏覽次數(shù)：3269返回列表
凝膠成像系統(tǒng)是實(shí)驗(yàn)室常用的一種儀器，其應(yīng)用范圍其廣泛。總的來說，凝膠成像系統(tǒng)可以用于：蛋白質(zhì)、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的分離純化結(jié)果作定性分析；確定生物分子的分子量；用于生物分子的定量分析。
樣品在電泳凝膠或者其他載體上的遷移率不一樣，以標(biāo)準(zhǔn)品或者其他的替代標(biāo)準(zhǔn)品相比較就會(huì)對(duì)未知樣品作一個(gè)定性分析。這個(gè)就是圖像分析系統(tǒng)定性的基礎(chǔ)。根據(jù)未知樣品在圖譜中的位置可以對(duì)其作定性分析，就可以確定它的成份和性質(zhì)。
樣品對(duì)投射或者反射光有部分的吸收，從而照相所得到的圖像上面的樣品條帶的光密度就會(huì)有差異。光密度于樣品的濃度或者質(zhì)量成線性關(guān)系。根據(jù)未知樣品的光密度，通過于已知濃度的樣品條帶的光密度指相比較就可以得到未知樣品的濃度或者質(zhì)量。這就是圖像分析系統(tǒng)定量的基礎(chǔ)。采用新技術(shù)的紫外透射光源和白光透射光源使光的分布加均勻，大限度的消除了光密度不均造成的對(duì)結(jié)果的影響。
凝膠成像系統(tǒng)具體可以用于哪些實(shí)驗(yàn)分析？
具體從使用分析的角度來看，凝膠成像系統(tǒng)可以應(yīng)用于分子量計(jì)算,密度掃描,密度定量,PCR定量等生物工程常規(guī)研究。
1、密度掃描
在分子生物學(xué)和生物工程研究中,常用到的是對(duì)蛋白表達(dá)產(chǎn)物占整個(gè)菌體蛋白的百分含量的計(jì)算。傳統(tǒng)的方法是利用專用的密度掃描,但利用生物分析軟件，結(jié)合白光照射的凝膠成像獲取圖片，就能完成此項(xiàng)工作。
2、PCR定量
PCR定量主要是指，如果PCR實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增出來的條帶不是一條，那么可以利用軟件計(jì)算出各個(gè)條帶占總體條帶的相對(duì)百分?jǐn)?shù)。就此功能而言，與密度掃描類似，但實(shí)際在原理上并不相同。PCR定量是對(duì)選定的幾條帶進(jìn)行相對(duì)密度定量并計(jì)算其占總和的百分?jǐn)?shù)，密度掃描時(shí)對(duì)選擇區(qū)域生成縱向掃描曲線圖并積分。
3、分子量定量
對(duì)于一般常用的DNA膠片,利用分子量定量功能,通過對(duì)膠上DNA Marker條帶的已知分子量注釋,自動(dòng)生成擬合曲線,并以它衡量得到未知條帶的分子量。通過這種方法所得到的結(jié)果較肉眼觀察估計(jì)要準(zhǔn)確很多。此方法也適用于對(duì)PAGE蛋白膠條帶的分子量測(cè)定。
4、密度定量
一般常用的測(cè)定DNA(脫氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)濃度的方法是紫外吸收法,但它只能測(cè)定樣品中的總核苷酸濃度,而不能區(qū)分各個(gè)長(zhǎng)度片段的濃度。利用凝膠成像系統(tǒng)和軟件,先將DNA膠片上某一已知其DNA含量的標(biāo)準(zhǔn)條帶進(jìn)行密度標(biāo)定以后,可以方便的單擊其他未知條帶，根據(jù)與已知條帶的密度做比較，可以得到未知DNA的含量。此方法也適用于對(duì)PAGE蛋白膠條帶的濃度測(cè)定。
