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價格：電議
所在地：上海
型號：
更新時間：2013-12-24
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公司地址：上海市楊浦區(qū)五角場高新技術產(chǎn)業(yè)園區(qū)
李小姐(女士)
本公司可提供免費代測服務!
大鼠胰蛋白酶(trypsin)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)
試劑盒使用說明書
本試劑僅供研究使用
目的：本試劑盒用于測大鼠血清，血漿及相關液體樣本中胰蛋白酶(trypsin)的含量。
試劑盒組成：
| 試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
| 說明書 | 1份 | 1份 | |
| 封板膜 | 2片(48) | 2片(96) | |
| 密封袋 | 1個 | 1個 | |
| 酶標包被板 | 1×48 | 1×96 | 2 |
| 標準品：2700ng/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2 |
| 標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2 |
| 酶標試劑 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2 |
| 樣品稀釋液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2 |
| 顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2 |
| 顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2 |
| 終止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2 |
| 濃縮洗滌液 | (20ml×20倍)×1瓶 | (20ml×30倍)×1瓶 | 2 |
實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠胰蛋白酶(trypsin)水平。用純化的大鼠胰蛋白酶(trypsin)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入胰蛋白酶(trypsin)，再與HRP標記的胰蛋白酶(trypsin)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胰蛋白酶(trypsin)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中大鼠胰蛋白酶(trypsin)濃度。
注意事項：
1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2． 濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3． 各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔一孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物請避光保存。
7． 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9． 本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在一、第二孔中分別加標準品100μl，然后在一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L)。
2. 加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置
4. 配液：將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。
2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?/span>2
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
計算：
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.95以上。
2.批內(nèi)與批見應分別小于9%和11%
檢測范圍：
100ng/L -2000ng/L
保存條件及有效期：
1.試劑盒保存：；2
2．有效期：6個月
本公司長期合作單位：中科院﹑醫(yī)科院﹑農(nóng)科院等重點國家實驗室﹑清華大學、北京大學、復旦大學、解放軍總醫(yī)院、一軍醫(yī)大學、安徽省農(nóng)科院等各大科研機構，本公司可提供免費代測服務!期待您的來電！
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