TSKgel色譜柱用于ADC藥物質(zhì)控分析

抗體偶聯(lián)藥物（ADC）是一種將抗癌藥物等偶聯(lián)到抗體中的生物藥物，近年來(lái)，以ADC和雙特異性抗體為代表的新型抗體藥物的研發(fā)進(jìn)展迅速，目前全球已有16款ADC藥物被批準(zhǔn)上市。此外，研發(fā)人員還開(kāi)始探索均一性高、副作用（脫靶毒性）少的第三代ADC藥物，因此ADC的純化及質(zhì)控分析方法將變得日趨重要。

1. ADC的關(guān)鍵質(zhì)量屬性及其分析法
ADC的關(guān)鍵質(zhì)量屬性及其分析法如表1所示。其中，非變性色譜的特點(diǎn)是在分離時(shí)可保持抗體的高級(jí)結(jié)構(gòu)和活性。在分離藥物和抗體的偶聯(lián)比 (DAR) 不同的成分時(shí)，常使用疏水色譜法。

此外，還可以使用揮發(fā)性流動(dòng)相的SEC/MS進(jìn)行DAR分析1）。作為與抗體ADCC活性相關(guān)聯(lián)的分離，研發(fā)人員還探討了通過(guò)親和色譜法來(lái)分離ADC2，3）。另有文獻(xiàn)稱(chēng)在抗體、寡核苷酸偶聯(lián)物 (AOC) 的偶聯(lián)比分析中使用了陰離子交換色譜 4）。

 表1. ADC關(guān)鍵質(zhì)量屬性及其分析法

* MRM: Multiple reaction monitoring

Ref.: G. Petrie et al, White paper, 2017, https://www.eag.com/wp-content/uploads/2018/01/M-028517-Keys-to-Rapid-IND-Submission.pdf

2. ADC非變性色譜分析的分離模式
分析ADC時(shí)，為了抑制有效載荷偶聯(lián)而增加的疏水性，即使是在非變性條件下，有時(shí)也需要在流動(dòng)相中添加異丙醇和乙腈等有機(jī)溶劑 (5～25%)。

表2中歸納了ADC非變性分析、變性分析的分離模式，以及各自的分離對(duì)象和特征。

 表2. ADC非變性分析/變性分析的分離模式

3. ADC藥物的SEC分析
尺寸排阻色譜法通常用于分離ADC的二聚體、多聚體和片段。下圖是使用TSKgel UP-SW3000分析ADC的譜圖。

圖2是ADC藥物在不同SEC色譜柱上的分離情況比較。相比其他兩款SEC色譜柱，TSKgel UP-SW3000在多聚體的分離上可以獲得多組分信息。

4. ADC的DAR值分析
在分離藥物和抗體的偶聯(lián)比不同的成分時(shí)，常使用分辨率高，非多孔型基質(zhì)HIC色譜柱。東曹公司近上市的新型HIC色譜柱TSKgel HIC-ADC Butyl提高了ADC的分離選擇性，能夠?qū)崿F(xiàn)高效的分析。

從譜圖中看到，TSKgel HIC-ADC Butyl分離ADC模擬物 (DAR=0,2,4,6,8) 的峰間距寬，比市售其他品牌的HIC色譜柱具有寬的分離范圍和出色的分離度。