TSKgel FcR-IIIA-NPR——高效篩選抗體ADCC活性色譜柱

在單克隆抗體藥物的初期研發(fā)階段中，通過(guò)對(duì)細(xì)胞株實(shí)施篩選，選出能產(chǎn)生滴度較高、ADCC活性較高的細(xì)胞株。此時(shí)常會(huì)用到的幾種評(píng)估方法是，通過(guò)生物檢定法測(cè)定ADCC活性；通過(guò)表面等離子共振法（SPR）測(cè)定人體IgG受體（FcγⅢa等）的親和力；通過(guò)LC/MS分析抗體酶切下來(lái)的糖鏈結(jié)構(gòu)等。但這些方法都需要花費(fèi)大量的時(shí)間和人力。

能夠把這些復(fù)雜的評(píng)估分析法由繁化簡(jiǎn)，并快速完成分析的HPLC色譜柱就是TSKgel FcR-IIIA-NPR。

使用TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱可以直接分離抗體，無(wú)需對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行前處理?？贵w主要可以分離出3個(gè)洗脫峰。已有研究表明，抗體糖鏈末端的半乳糖數(shù)量越多，在此色譜柱中的保留能力越強(qiáng)，而保留能力越強(qiáng)的洗脫峰，其ADCC活性就越高。

細(xì)胞培養(yǎng)液中單克隆抗體的分離

TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱可以用來(lái)測(cè)定和監(jiān)控細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)抗體糖鏈的性狀變化。取不同培養(yǎng)天數(shù)的細(xì)胞培養(yǎng)液，使用Protein A填料對(duì)抗體樣品粗純后，再采用TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱分析的結(jié)果如圖所示。

抗體細(xì)胞培養(yǎng)天數(shù)和產(chǎn)生抗體的變化

隨著培養(yǎng)天數(shù)的延長(zhǎng)，抗體的3個(gè)洗脫峰會(huì)向前側(cè)的洗脫峰位移。雖然延長(zhǎng)了細(xì)胞培養(yǎng)天數(shù)，抗體的產(chǎn)量增加，但是由于受到細(xì)胞外糖鏈修飾酶的影響，在色譜柱中的保留能力較高的抗體（多糖的末端半乳糖數(shù)量較多的抗體）的洗脫峰反而減少了。因此，可以推定產(chǎn)生的抗體的ADCC活性已經(jīng)降低。

TSKgel FcR-IIIA-NPR的主要分析用途

①確認(rèn)不同細(xì)胞株 (CHO細(xì)胞、HEK細(xì)胞等) 中抗體的性狀變化。

②確認(rèn)多個(gè)細(xì)胞株篩選時(shí)抗體的性狀變化。

③確認(rèn)當(dāng)改變細(xì)胞培養(yǎng)基添加劑時(shí)抗體的性狀變化

④細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中隨培養(yǎng)天數(shù)的變化導(dǎo)致抗體性狀變化的確認(rèn)。

⑤細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模放大 (改培養(yǎng)方法) 時(shí)，確認(rèn)抗體是否發(fā)生性狀變化。