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古朵資訊| ELISA實(shí)驗(yàn)中標(biāo)曲和樣本的顯色問題
發(fā)布時(shí)間：2023-11-29瀏覽次數(shù)：868返回列表
古朵資訊| ELISA實(shí)驗(yàn)中標(biāo)曲和樣本的顯色問題
ELISA實(shí)驗(yàn)是我們科研實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常使用的實(shí)驗(yàn)方法，看似簡單其實(shí)有許多需要我們?nèi)プ⒁獾模裉旃哦渖锛夹g(shù)小編就和大家介紹下實(shí)驗(yàn)中常見的標(biāo)曲和樣本的顯色問題。
一、標(biāo)曲不顯色或顯色很弱，樣本顯色。
溶解標(biāo)準(zhǔn)品以及倍比稀釋時(shí)，未渦旋震蕩或不夠充分。標(biāo)準(zhǔn)品溶解時(shí)，需要渦旋震蕩，以保證充分溶解。在做倍比稀釋時(shí)，也要渦旋震蕩以保證充分混勻。單純依靠移液器反復(fù)吹打，效率較低、效果也不一定好。
二、標(biāo)曲和樣本均不顯色。
在孵育階段靜置在桌面上，這樣非常不利于抗原抗體之間的充分接觸，導(dǎo)致顯色偏弱。推薦孵育階段，使用ELISA專用的微孔板振蕩器，調(diào)至合適的頻率，使抗原抗體充分接觸，保證結(jié)合效果。
如果排除上述原因，有可能是漏加了某個(gè)組分，如檢測抗體、酶等。所以在實(shí)驗(yàn)過程中，一定要做好標(biāo)記和記錄，或者使用添加染料的ELISA試劑盒。
三、標(biāo)曲顯色，樣本不顯色。
到這種情況，很多人覺得是試劑盒問題，這其實(shí)是一個(gè)誤區(qū)。任何一種實(shí)驗(yàn)方法，都有其局限性，當(dāng)樣本中目的蛋白濃度極低或者樣本中干擾因素較強(qiáng)，就無法檢測到。目前ELISA仍然是蛋白檢測靈敏度的方法，與不同技術(shù)結(jié)合后，衍生出了多種類型的ELISA，提高了檢測靈敏度。如采用信號(hào)增強(qiáng)劑的高敏ELISA、ECL為底物的化學(xué)發(fā)光ELISA、采用熒光法檢測的ELISA、結(jié)合PCR擴(kuò)增的免疫PCR等等。
對于目的蛋白濃度特別低的樣本，可以嘗試用高敏ELISA，但這也并不意味著一定能檢測到樣本濃度，只能說可以提高樣本的可測率，并使結(jié)果加可靠。因?yàn)橥ǔＳ闷胀‥LISA檢測的樣本OD值都偏低，甚至低于標(biāo)準(zhǔn)品濃度的S7點(diǎn)，雖然可以計(jì)算得到數(shù)值，但實(shí)際上這個(gè)數(shù)值的可信度已經(jīng)降低了。而高敏ELISA可提高樣本OD值，使之盡量位于標(biāo)曲范圍內(nèi)，得到的數(shù)值也加可信。
四、標(biāo)曲和樣本都顯色，但復(fù)孔的CV大。
這個(gè)問題就跟移液器和實(shí)驗(yàn)者的操作有關(guān)了。移液器的使用維護(hù)不規(guī)范，就會(huì)造成移液的誤差較大。實(shí)驗(yàn)者自身的操作習(xí)慣、加樣的一致性對復(fù)孔的CV也有很大影響。個(gè)人的操作可以在空白板上練習(xí)移液動(dòng)作，或者在幾十個(gè)離心管中加入相同體積的水，通過電子天平稱量，檢驗(yàn)移液的度。同時(shí)還需練習(xí)加快加樣速度，減少從個(gè)樣本到后一個(gè)樣本加樣時(shí)間過長導(dǎo)致的差異。
ELISA實(shí)驗(yàn)中有關(guān)標(biāo)曲和樣本的顯色問題主要就是以上4種，當(dāng)然還會(huì)存在其他的問題，在這里就不一一介紹了，大家在操作過程中要細(xì)心謹(jǐn)慎，防止出現(xiàn)以上的問題。
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