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ELISA試劑盒操作步驟及試劑盒類型總結
發布時間：2023-11-14瀏覽次數：899返回列表
ELISA試劑盒操作步驟及試劑盒類型總結
ELISA試劑盒操作步驟的檢測
在ELISA試劑盒中用作固相載體的小珠一般為直徑0.6cm的圓珠，表面經磨砂處理后吸附面積大大增加。ELISA試劑盒板孔的吸附面積約為200mm2，小珠均為1000mm2，將近ELISA板孔的5倍。吸附面積的增大即意味著固相抗原或抗體量的增加。再者，球型小珠的表面弧度有利于吸附的抗原決定簇或抗體結合位點的暴露面處于佳反應狀態。
因此珠式ELISA試劑盒的反應往往為靈敏。小珠的另一特點是易于使洗滌徹底，使用特殊的洗滌器，使小珠在洗滌過程中滾動淋洗，其洗滌效果遠較板孔的浸泡式為好。但由于磨砂工藝的難度較大，小珠的均一性較差。用于EILSA的產品稱為ELISA板，上標準的微量滴定板為8×12的96孔式。為便于作少量標本的檢測，有制成8聯孔條或12聯孔條的，放入座架后，大小與標準ELISA板相同。ELISA試劑盒板的特點是可以同時進行大量標本的檢測，并可在特制的比色計上迅速讀出結果。現在已有多種自動化儀器用于微量滴定板型的ELISA試劑盒檢測，包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟，對操作的標準化極為有利。聚苯乙烯經射線照射后，其吸附性能特別是對免疫球蛋白的吸附性能增加，應用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多，但用于間接法測抗體時空白值較大。
良好的ELISA試劑盒板應該是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之間、同一板各孔之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA試劑盒板由于原料的不同和制作工藝的差別，各種產品的質量差異很大，因此，每一批號的ELISA試劑盒板在使用前須事先檢查其性能。常用的檢查方法為：以一定濃度的人IgG(一般為10ng/ml)包被ELISA板各孔，洗滌后每孔內加入適當稀釋度的酶標抗人IgG抗體，保溫后洗滌，加底物顯色，終止酶反應后，分別測每孔溶液的吸光度。控制反應條件，使各孔讀數在吸光度0.8左右。計算全部讀數的平均值。所有單個讀數與全部讀數的均數之差，應小于10%。
ELISA試劑盒主要有以下幾種類型：
ELISA實驗的原理和常見辦法。ELISA試劑盒可用于測定抗原，也可用于測定抗體。
根據試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體條件，可設計出各種不同類型的檢測方法。用于科研檢驗的
1.雙抗體夾心法測抗原雙抗體夾心法是檢測抗原常用的方法。
操作步驟如下：
1將特異性抗體與固相載體聯結，形成固相抗體。洗滌除去未結合的抗體及雜質。
2加受檢標本，保溫反應。標本中的抗原與固相抗體結合，形成固相抗原抗體復合物。洗滌除去其他未結合物質。
實驗原理：
1.包被：抗原/抗體，固相化
2.反響：1 待測抗體/抗原; 2 酶標抗原/抗體
3.洗滌：使結合在固相上的抗原抗體復合物與未結合的別離
4.底物顯色：定性/定量剖析
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