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技術分享：直接競爭ELISA試劑盒和間接競爭ELISA試劑盒區別
發布時間：2023-11-14瀏覽次數：874返回列表
直接競爭ELISA試劑盒和間接競爭ELISA試劑盒區別
因此，間接法的抑制曲線斜率會大于競爭法。因為抑制率越大則斜率越大，從而靈敏度越大。(假設零管變異5%，以兩倍SD為靈敏度限，則為90%相對結合率，則間接法可以在較低的待測抗原濃度達到這一相對結合率，因此靈敏度要高。)在進行系統放大時，間接法一般可以使用酶標二抗。因為二抗可以針對抗體的多個部位，所以存在放大效應，從而能提高間接法的靈敏度。直接法一般難以進行放大，常用的有生物 素化抗原與酶標親和素，但模式上似乎不存在放大效應。
1、直接競爭，標記抗原，與檢測樣品中的抗原競爭抗體。
2、間接競爭，標記抗體，固相抗原與液相抗原(樣品)競爭標記抗體。
3、定義間接競爭法的模型：包被抗原，用HRP-抗體與樣本一起加入。樣本中的Ag與Solid-Ag競爭HRP-Ab，固相吸附的HRP-Ab與樣本中的Ag濃度成反比。直接競爭法的模型：包被抗體，用HRP-抗原與樣本一起加入。樣本中的Ag與HRP-Ag競爭Solid-Ab，固相吸附的HRP-Ag與樣本中的Ag濃度成反比。
4、競爭法的理論基礎：是限量抗體。只有在限量抗體基礎上，兩種抗原才會形成競爭關系。
5、間接競爭法具備較高靈敏度原因。直接競爭法里，標記抗原與待測抗原均是液相，與抗體的結合機會是一樣的，例如有1份標記抗原與1份待測抗原競爭1份抗體，那么有50%的標記抗原能與抗體結合，所以標記抗原的相對結合率為50%。間接法里，固相抗原與抗體的接觸面積較小，固相抗原與待測抗原的結合抗體機會是不平等的，接近順序飽和法，即只有與待測抗原結合剩余的抗體才會與固相抗原結合，同樣有1份固相抗原與1份待測抗原競爭1份抗體時，基本上抗體會被待測抗原中和掉，與固相抗原結合的抗體非常少。
6、間接法的高靈敏度難以實現的原因：雙抗體 夾心的免放(IRMA)模式剛出現時，也被模型證明靈敏度優于競爭法的放免(RIA)，原因也是較大的斜率，但是IRMA的高靈敏度一直到單抗發展后才得以實現。
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