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ELISA試劑盒檢測樣品中sIL-2R含量全過程
發布時間：2023-10-16瀏覽次數：1150返回列表
ELISA試劑盒檢測樣品中sIL-2R含量全過程
ELISA試劑盒檢測樣品中sIL-2R含量需預備的資料和試劑
(1)純化或重組的IL-2R蛋白(α鏈，P55，CD25，Tac抗原)(40.000u/ml)
(2)FITC符號的抗IL-2R McAb(0.2μg/ml)：FITC為異硫氰酸熒光素，這兒僅作為半抗原運用，而不作為熒光素符號。
(3)堿性磷酸酶符號的兔抗FITC抗體(酶標抗體)
(4)對硝基苯磷酶鹽底物液;用pH9.8的二乙醇胺緩沖液溶解，配成濃度為1mg/ml。
(5)1%牛血清白蛋白-PBS(1%BSA-PBS)：為封閉液點稀釋液
(6)不同倍比稀釋度的sIL-2R規范品：以1% BSA-PBS稀釋。
(7)洗刷液(0.05%Tween20-PBS)
(8)待測sIL-2R樣品
(9)96孔酶標板(聚苯乙烯板)，酶標儀，波長465nm濾光片
(10)刻度吸管，毛細吸管，加樣器(頭)，4℃冰箱
ELISA試劑盒檢測樣品中sIL-2R含量具體操作步驟
(1)以必定濃度的純化或重組的IL-2R(P55)蛋白包被96孔酶標板，100ul/孔，4℃過夜(16-72h);
(2)棄包被液，用1%BSA-PBS封閉非特異性結合位點，200ul/孔，置室溫2h;
(3)用洗刷液加滿各孔置3min，然后傾去，反復洗刷3次;
(4)別離參加不同稀釋度的sIL-2R規范品及待測樣品，50μl/孔;
(5)各孔均參加FITC符號的IL-2R McAb，50μl/孔，充沛混勻后置室溫2h;
(6)同上洗刷3次;
(7)各孔均參加堿性磷酶酶符號的兔抗FITC抗體，100μl/孔，置室溫1h;
(8)同上洗刷3次;
(9)各孔均參加底物液，100μl/孔，置室溫15-30min;
(10)用酶標儀以波長405nm測各孔OD值。
ELISA試劑盒檢測樣品中sIL-2R含量結果剖析辦法
(1)以sIL-2R規范品各稀釋度對應的濃度值為橫座標(X)，相應的OD值為縱座標(Y)，在一般座標紙上制作競賽按捺規范曲線，OD值隨規范品sIL-2R濃度升高而下降。
(2)依據待測樣品所測得的OD值，在規范曲線上查得樣品sIL-2R含量。
(3)ELISA試劑盒檢測樣品中sIL-2R含量運用本辦法時，不需要核算按捺百分率。
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