倉鼠E選擇素酶聯(lián)免疫試劑盒操作步驟

  倉鼠E選擇素酶聯(lián)免疫試劑盒 試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中SELE 表達(dá)。用純化的SELE 抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中SELE 相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的SELE 抗體結(jié)合，形成抗體 抗原 酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值)，與 CUTOFF 值相比較，從而判定標(biāo)本中SELE 的存在與否。

  操作步驟：

  1. 編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)

  2. 加樣：分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照 50%l。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液 40%l，然后再加待測(cè)樣品 10%l。加樣將樣品加 于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，

  3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

  4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

  5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù) 5 次，拍干。

  6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50%l，空白孔除外。

  7. 溫育：操作同 3。

  8. 洗滌：操作同 5。

  9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50%l，再加入顯色劑 B50%l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘.10. 終止：每孔加終止液 50%l，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

  11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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