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人組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)ELISA試劑盒實驗說明書
發布時間：2023-08-23瀏覽次數：942返回列表
人組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)ELISA試劑盒實驗說明書
實驗類型：ELISA，酶聯免疫吸附測定，雙抗夾心法。
應用范圍：免疫學檢驗，血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本。
用途
該試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿或其他相關生物液體中濃度。
檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗體包被于酶標板上，實驗時樣品或標準品中的抗原會與包被抗體結合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素。抗體與結合在包被抗體上的抗原結合、生物素與親和素特異性結合而形成免疫復合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現藍色，加終止液后變成黃色。用酶標儀在450nm波長處測OD值，抗原濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標準曲線計算出樣品中指標的濃度。
反應類型夾心法
規格96T
反應時間4.5h
反應性通用
檢測方法Colormetric
靈敏度檢測下線除以10
樣本體積100μL
樣本類型血清、血漿或其他相關生物液體
特異性可檢測樣本中的指標,且與其它相關蛋白無明顯交叉反應
重復性板內，板間變異系數均<10%
樣品活化方法
生物樣品中的通常以無活性的形式存在，在檢測指標活性前必須進行活化處理。
活化方法如下：
血清、血漿： 280 μL標準品&樣品稀釋液中加入40 μL樣品，混勻，加入40 μL活化試劑1，室溫孵育10分鐘。再加入40 μL活化試劑2，混勻后立即檢測。
注意：樣品被稀釋了10倍!
細胞培養上清：20 μL標準品&樣品稀釋液中加入100 μL樣品，混勻，加入40 μL活化試劑1，室溫孵育10分鐘。再加入40 μL活化試劑2，混勻后立即檢測。
注意：樣品被稀釋了2倍!
組織勻漿：1960 μL標準品&樣品稀釋液中加入40 μL樣品，混勻后檢測。
注意：樣品被稀釋了50倍!
度
板內度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在1塊板子上檢測20次。板間度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在3塊板子上檢測20次。 批內變異系數批間變異系數
樣本123123
數量202020202020
平均值( MERGEFIELD 單位ng/mL)0.411.074.960.471.254.24
標準差0.020.050.220.030.060.2
變異系數 (%)4.884.674.436.384.84.72
回收率
分別往5個不同樣本中添加已知濃度的目標蛋白，做回收實驗，得出回收率范圍和平均回收率。樣本類型回收率范圍 (%)平均回收率 (%)
血清(n=5)94-110102
血漿(EDTA)(n=5)90-10296
細胞上清(n=5)95-10698
線性
分別往5個樣本中添加已知濃度的目標蛋白，做回收實驗，得出回收率范圍及平均回收率。將5個樣本分別稀釋2倍，4倍，8倍，16倍做回收實驗，得出回收率范圍及平均回收率。 血清(n=5)血漿(EDTA)(n=5)細胞上清(n=5)
1:2回收率范圍(%)99-10895-10592-104
平均回收率(%)10510297
1:4回收率范圍(%)95-10990-10097-105
平均回收率(%)10296100
1:8回收率范圍(%)89-10389-10496-108
平均回收率(%)9797102
1:16回收率范圍(%)88-10298-10892-105
平均回收率(%)94104100
試劑盒組成及保存
未拆封的試劑盒可在4℃保存一周;如果一周以后才使用試劑盒，請拆開試劑盒按照下表中的條件分別保存各組分。試劑盒組成48孔配置96孔配置
說明書1份1份
封板膜2片2片
密封袋1個1個
酶標包被板1×481×96
標準品0.3ml×6管0.3ml×6管
酶標試劑5 ml×1瓶10 ml×1瓶
樣品稀釋液3 ml×1瓶6 ml×1瓶
顯色劑A液3 ml×1瓶6 ml×1瓶
顯色劑B液3 ml×1瓶6 ml×1瓶
終止液3 ml×1瓶6 ml×1瓶
20×濃縮洗滌液15ml×1瓶25ml×1瓶
試劑盒組成48孔配置96孔配置
說明書1份1份
封板膜2片2片
密封袋1個1個
說明：所有試劑瓶蓋須旋緊以防止蒸發和微生物的污染。
試劑體積以實際發貨版說明書為準。相關試劑在分裝時會比標簽上標明的體積稍多一些，請在使用時量取而非直接倒出。
操作步驟
1. 標準品的加樣：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;。
2. 加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 加酶：每孔加入酶標試劑100μl，空白孔除外。
4. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
5. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
6. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
7. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
8. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。
9. 測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
試驗所需自備物品
1. 酶標儀(450nm波長濾光片)
2. 移液器，EP管及一次性吸頭：0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL
3. 37℃恒溫箱，雙蒸水或去離子水
4. 吸水紙
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