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古朵小課堂：免疫組化的二抗還有區別
發布時間：2023-08-01瀏覽次數：867返回列表
免疫組化大家基本上都做過，你知道有二抗，也應該知道免疫組化的原理就是一抗結合到目標蛋白，再有二抗來進行信號放大，大概是這樣：
但是你知道二抗的信號放大實際上有多種方法……這就需要你進行二抗標記方法的選擇，簡單的二抗標記方法是直接法：
就是直接在二抗上標記酶，比如HRP，來進行顯色，這樣的二抗實際上很便宜，但是缺點就是靈敏度低，好多低豐度的蛋白，結合不上，免疫組化染出來的效果就不太好。
第二種方法，叫做PAP，比如二抗標記了HRP，他們就在孵育二抗后，再孵育一種能結合HRP的一抗，就像這樣：
這種方法靈敏度是上去了，但是非特異性增高了，于是被主流淘汰了。
第三種方法被稱為ABC法或者SABC法，主要是在二抗上標記生物素，孵育二抗后，加入親和素以及標記了HRP的生物素，以這樣的聚合方式，來進行信號的放大作用：
這種方法的優點是能夠成倍提高靈敏度，但同時也會提高非特異性，于是就產生了第四種方法，LSAB法標記的二抗：
這種方法，直接在親和素上加上HRP標記，靈敏度也很高，同時降低了SABC法的非特異性。而且，LSAB法在實驗的時一般孵育時間短（通常就10分鐘）。
但SABC法和LSAB法在實驗過程中會需要進行內源生物素封閉，會麻煩一些。為了省去麻煩，就產生了第五種標記方法，也就是Polymer法，就是在二抗上標記聚合的HRP：
這樣二抗的信號就得到了放大，靈敏度也提高了，但Polymer法、SABC法、LSAB法，都不能用于定量實驗，只能用在IHC上。
那免疫熒光呢？免疫熒光主流是采用直接法、LSAB法，以及直接標記或者LSAB標記的三抗來進行信號放大的。總結一下，就是直接法的二抗便宜但是靈敏度差；PAP法基本已經淘汰，LSAB和SABC法的靈敏度高，但是貴，步驟多；Polymer法靈敏度高，步驟簡單，但是貴。
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