培養(yǎng)基中的添加物、PH值、保存的問題

  —細胞培養(yǎng)用液：除培養(yǎng)基、血清、谷氨酰胺外，其他幾種液體也屬必須，不可省略：

  (1)雙抗：200倍，(1ml/支)其終濃度為青霉素100U/ml;鏈霉素100ug/ml，-24 oC保存。

  (2)L-谷氨酰胺：100倍，(1ml/支)， 終濃度2mM，-24 oC保存。

  (3)丙酮酸鈉：配制濃度50mM，4ml/支，終濃度為1mM/ml， -24 oC保存。

  (4)Hepes液：配制濃度1M(5ml/支)，一支Hepes加入到200ml 完全培養(yǎng)基中，終濃度為25mM/ml，常溫保存。

  —液體培養(yǎng)基中谷氨酰胺的作用，及使用方法。

  幾乎所有的細胞對谷氨酰胺有較高的要求，細胞需要谷氨酰胺合成蛋白質，在缺少谷氨酰胺時，細胞生長不良而死亡。所以，各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，應置-20 ?C冰凍保存，用前加入培養(yǎng)基中。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4 度 冰箱儲存兩周以上時，應重新加入原來量的谷氨酰胺。

  —培養(yǎng)用液pH對細胞生長的影響

  由于，大多數(shù)細胞適宜pH為7.2~7.4，偏離此范圍對細胞將產生有害的影響。各種細胞對pH的要求也不完全相同，原代培養(yǎng)細胞一般對pH變動耐受差，無限細胞系耐受力強。

  但總體來說，細胞耐酸性比耐堿性強一些，偏酸環(huán)境中geng利于細胞生長。因此，我們在配制培養(yǎng)用液時，可把液體的pH稍微調得偏酸一些。液體在經過0.10um或0.22um濾膜過濾時，溶液的PH還會向上浮動0.2左右。

  —液體培養(yǎng)基的保存是冷藏好?還是冷凍好?

  要冷藏!因為液體培養(yǎng)基經冷凍后再經溶化時，其溶液的PH值會發(fā)生改變，溶液往往變堿，某些成分溶解也會受到影響對細胞生長不利。故液體培養(yǎng)基一定要存放在冷藏箱中，通常液體培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個月 ~ 一年

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