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ELISA試劑盒利用血清提取蛋白的方法及如何避免加樣產生氣泡
發布時間：2023-01-31瀏覽次數：908返回列表
ELISA試劑盒利用血清提取蛋白的方法及如何避免加樣產生氣泡
進口ELISA試劑盒使用血清提取蛋白是從血清中提取的蛋白質，適用于食物工業的食物增加劑和醫藥制劑。
通常提取蛋白質的辦法是離心分離，除掉血漿，使二價鐵血紅素酸化，并將其掃除。但是這種辦法產量很低(100毫升血液僅可提取蛋白質約10)克。
為了進步蛋白質得率，選用新的辦法，即用每分鐘2 500～3000轉的速度 在15～30分鐘內將血液進行離心分離，使醋酸和氯化鈉的混合物(比值為2∶1～4∶1)酸化。在溫度90～110℃下加熱5～15分鐘。冷卻，再增加yi醚。
制作辦法：
取經過安穩的血液，作離心分離15～30分鐘，每分鐘轉速為2 500～3000轉。從而獲得固形物，去除血漿，用水使固形物沉渣溶解。置血紅素于培養基中。為了使培養基酸化而使血紅素分子中的二價鐵血紅素和血球蛋白的結合體分離 預先制備好醋酸和氯化鈉的混合物 并將它加熱到90～110℃。混合時將固形物的溶血產品緩慢地增加到加熱的混合物中。從頭把溫度逐漸地升高到沸點，煮沸5～15分鐘，以便使結合體徹底分離，接著將混合物逐步冷卻到室溫。
為了使二價鐵血紅素溶解并消除，進口ELISA試劑盒在混合物中按溶物產品比值2∶1～5∶1增加yi醚。這時提取出來的蛋白質呈白棉絮狀。將溶液過濾，再用yi醚清洗。
100毫升血中提取的蛋白質產品相當于14.4克。使用這種辦法，每100毫升的血液可進步蛋白質得率45。
ELISA試劑盒如何避免加樣產生氣泡呢?
通常氣泡都是聚集在ELISA試劑盒酶標板的孔周圍，導致孔中液體不能與孔壁有效接觸，使孔內反應不均一。很多說明書、教科書上也都提到，加樣時要避免出現氣泡，這到底是什么原因呢?因為在做實驗的過程中，有時為了打干凈槍頭里面的液體，很容易產生氣泡，是不是這樣對實驗結果會后什么影響?
1.通常氣泡都是聚集在酶標板的孔周圍，導致孔中液體不能與孔壁有效接觸，使孔內反應不均一。
2.包被時有氣泡的話，將導致包被不完全實際包被量下降--弱陽性甚至假陰性。
3.封閉時有氣泡的話，將導致大量未結合位點的存在，引起非特異性結合--本底增高，假陽性。
4.加樣時有氣泡的話，抗原抗體不能有效的結合--弱陽性甚至假陰性。
5.加二抗時有氣泡的話，抗原抗體不能有效的結合--弱陽性甚至假陰性(競爭法相反----假陽性)。
6.加顯色液時有氣泡的話---顯色不完全。
7.加終止液時有氣泡的話(1、不能完全終止反應 2、影響酶標儀比色，OD值增高)
8.洗滌時有氣泡的話，非特異性結合物不能完全洗去，做無用功。
避免方法：
1.加樣時盡量靠近孔底(不要接觸孔底)，用力均勻，不要過快過猛。
2.封閉時一定要加滿孔。
3.洗滌時一定要加滿孔(重要)，氣泡會浮上來*終驅除。手工洗板時一定要吸干水分并用力拍干。
進口ELISA試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品，勵志研發和銷售的綜合性生物公司，產品遠銷多個國家和地區，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求”的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發高質量的新產品，提供客戶滿意的綜合服務質量”的方針。上海古朵生物公司中“古朵”取自good的音譯，寓意是質量好，品牌好，服務好!歡迎新老客戶洽談!
