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細胞因子ELISA試劑盒在處理和保存方面需考慮那些問題
發布時間：2023-01-10瀏覽次數：993返回列表
細胞因子ELISA試劑盒在處理和保存方面需考慮那些問題
一、血清標本如是以無菌操作別離，則能夠在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則主張冰凍保存。樣本的長時間保存，應在-70℃以下。
二、標本在保存中如呈現細菌污染所形成的的混濁或絮狀物時，應離心沉淀后取上清檢測。
三、要注意防止呈現嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團，其有相似過氧化物的活性，因此，在以HRP為符號酶的ELISA測定中，如血清標本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，然后與后面加入的HRP底物反響顯色。
四、冰凍保存的血清標本須注意防止因停電等形成的重復凍融。標本的重復凍融所發生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子發生破壞效果，然后引起假陰性結果。此外，凍融標本的混勻亦應注意，不要進行劇烈振動，重復倒置混勻即可。
五、細胞因子ELISA試劑盒，樣本的采集及血清別離中要注意盡量防止細菌污染，一則細菌的成長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白發生分化效果;二則一些細菌的內源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應酶作符號的測定辦法發生非特異性干擾。
ELISA檢測試劑盒有哪些免疫測定：
ELISA檢測試劑盒中一般有3次加樣步聚，即加標本，加酶結合物，加底物。加樣時應將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部，避免加在孔壁上部，并留意不行濺起，不行發作氣泡。
加標本一般用微量加樣器，按規則的量參加板孔中。每次加標本應換吸嘴，避免發作交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定(如間接法 ELISA)需用稀釋的血清，可在試管中按規則的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中參加稀釋液，再在其中參加血清標本，然后在微型震動器上震動1分鐘以保 證混和。加酶結合物使用液和底物使用液時可用定量多道加液器，使加液進程迅速完結。
在ELISA檢測試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響，即加標本和加酶結合物后。抗原抗體反響的完結需要有一定的溫度和時刻，這一保溫進程稱為溫育(incubation)，有人稱之為孵育，在ELISA中似不恰當。
ELISA屬固相，抗原、抗體的結合只在固相表面上發作。以抗體包被的夾心法為例，參加板孔中的標本，其中的抗原并不是都有平等的和固相抗結合的時機，只要貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體觸摸。這是一個逐漸平衡的進程，因而需經分散，才干到達反響的結尾。在這以后參加的酶符號抗體與固相抗原的結合也同樣如此。這便是為什么ELISA反響總是需要一定時刻的溫育。
溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃(冰箱溫度)等。37℃是試驗室中常用的保溫溫度，也是大多數抗原抗體結合的適宜溫度。在建立ELISA方法作反響動力學研究時，試驗表明，兩次抗原抗體反響一般在37℃經1-2小時，ELISA檢測試劑盒產物的生成可達高峰。為加速反響，可進步反響的溫度。
有些試驗在43℃進行，但不宜采用高的溫度。抗原抗體反響4℃為*，在放射免疫測定中多使反響在冰箱中，以構成多的沉積。但因所需時刻太長，在ELISA中一般不予采用。
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