古朵辣根過氧化物酶您了解多少？

  一、簡介

  辣根過氧化物酶，英文名Horseradish peroxidase，簡稱HRP，酶學(xué)編號(hào)EC1.11.1.7;是來源于辣根的一組具有一定酶活活性的同工酶，其中辣根過氧化物酶同工酶C(HRP C)含量高，在辣根的根部含量為豐富。

  二、結(jié)構(gòu)

  辣根過氧化物酶主要由糖蛋白(酶蛋白)和鐵(III)原卟啉IX(輔基)組成。糖蛋白中糖含量一般是18~22%。由于辣根過氧化物酶的酶蛋白和輔基分別在紫外波長275nm和403nm下有大吸收峰，分離得到的HRP都有一個(gè)OD403nm/OD275nm的比值RZ(德文Reinheit Zahl)。RZ值的大小表示了酶的純度，純度較高的HRP的RZ值一般在3.0以上，RZ值越小，酶純度越低。源葉生物根據(jù)RZ值的不同，分別有以下幾款對應(yīng)的產(chǎn)品：

  過氧化物酶(辣根) RZ>3，酶活≥300u/mg;

  過氧化物酶(辣根) RZ>2.5，酶活≥250u/mg;

  過氧化物酶(辣根) RZ>1.5，酶活≥150u/mg;

  HRP是一組同工酶，由于HRP C含量高，對HRP C結(jié)構(gòu)研究的也為詳細(xì)。HRP C是一組單亞基糖蛋白，包含308個(gè)氨基酸殘基和8個(gè)糖鏈，每分子HRP C中有2分子Ca 2+ 、1分子鐵(III)原卟啉IX輔基和4對二硫鍵，相對分子質(zhì)量約為44 000。辣根過氧化物酶的作用機(jī)制，酶學(xué)特性，等電點(diǎn)等都與其結(jié)構(gòu)息息相關(guān)。

  三、酶的作用機(jī)制和酶學(xué)特性

  HRP可以催化底物過氧化氫(H2O2)和供氫體(DH2)生成自由基和水，

  供氫體有很多，如芳香族化合物，酚類，吲哚，胺類和磺酸鹽類等。在實(shí)際應(yīng)用中，供氫體DH2多選擇溶液為無色的物質(zhì)，通過反應(yīng)生成有色物質(zhì).D，從而通過對反應(yīng)后溶液顏色深淺的測定，來得到需要的數(shù)值。常用的供氫體DH2有古朵TMB，古朵ABTS和焦性沒食子酸。

  由于供氫體多種多樣，針對不同的供氫體，HRP反應(yīng)的適pH都不太一樣，但多數(shù)是在5.0左右，反應(yīng)的溫度一般就是常溫25℃左右。

  三、應(yīng)用

  由于HRP性質(zhì)穩(wěn)定，天然來源豐富，且分子量小，容易制得活性較高的純酶，所以應(yīng)用較為廣泛。

  1. HRP是目前在ELISA中應(yīng)用為廣泛的標(biāo)記用酶之一，主要是因?yàn)槠淙菀字频茫瑑r(jià)格相對較低，且性質(zhì)穩(wěn)定，耐熱和有機(jī)溶劑，與抗原或抗體偶聯(lián)后，活性損失很小。

  2. HRP也常用與污水處理。工業(yè)廢水中含有大量的苯酚，雙酚A等分類和芳香胺類化合物，等環(huán)境污染較大，HRP可以將這些污染物作為底物，氧化成自由基，自由基在聚集成沉淀聚合物，從而大大降低對環(huán)境的污染。

  3. HRP近幾年來被研究用作食品添加劑。由于HRP本身無害，反應(yīng)條件溫度，反應(yīng)易控制，近年來被研究用于食品的保鮮，解毒和檢測等領(lǐng)域。

  4. 檢測領(lǐng)域：HRP可以與葡萄糖氧化酶古朵試劑聯(lián)用，用以檢測葡萄糖含量。

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