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怎么建穩(wěn)轉株才能真的穩(wěn)？
發(fā)布時間：2021-11-18瀏覽次數：1083返回列表
穩(wěn)定轉染，即進入細胞的質粒整合入細胞基因組中，并能隨細胞分裂穩(wěn)定傳遞下去。這是相對瞬時轉染而言的。
瞬時轉染的表達時間短暫，外源基因導入整合基因組的幾率非常低，絕大部分以游離形式存在，不能隨細胞分裂而一同復制，導致后拷貝數被稀釋，無法達到持續(xù)表達外源基因的目的。一般用轉染試劑進行質粒轉染，多為瞬時轉染。
一般如下情況需要構建穩(wěn)定株：
1) 長期在目的細胞中研究基因功能，通過構建穩(wěn)定株，可以大大降低頻繁轉染或者病毒包裝的成本，也極大方便實驗研究；
2)部分蛋白半衰期極長，瞬時RNA只能干擾表達，無法去除已經表達的目的蛋白，通過構建穩(wěn)定株可以實現好的基因干擾效果；
3)瞬轉往往會引入極高拷貝數的表達，導致因為人為因素造成實驗結果的不，構建穩(wěn)定株可以幫助篩選拷貝數適量的細胞進行實驗研究；
4)需要用誘導表達系統的，主要是一些致死基因或者是需要時空表達的；
5)需要用細胞做動物實驗的，比如裸鼠成瘤等，往往需要構建成穩(wěn)轉株。
構建穩(wěn)定株的方法：
其實用脂質體轉染、磷酸鈣轉染法等理論上是可以構建穩(wěn)定株的，但這些方法整合入基因組的效率極低，很難成功。而慢病毒可以攜帶外源基因隨機整合進基因組，效率很高，是建立穩(wěn)定株的優(yōu)方式。
構建穩(wěn)定株的注意點：
穩(wěn)定株構建是個長期過程，從質粒構建到慢病毒包裝，再到細胞感染及后期的篩選，每一步都至關重要，所以建立穩(wěn)轉株花個半年時間，也是常有的事，而且要承擔病毒包裝不成功，細胞感染效率低等風險。
