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古朵生物：如何合理地選擇稀釋劑？
發(fā)布時(shí)間：2021-09-27瀏覽次數(shù)：975返回列表
應(yīng)用高效液相色譜檢測(cè)時(shí)，流動(dòng)相的選擇十分重要，因此稀釋劑的選擇就成為重中之重。根據(jù)高效液相色譜檢測(cè)的不同要求，可以選擇不同的類型的稀釋劑。而選擇時(shí)的LC-MS級(jí)這一指標(biāo)到底有何意義?本文對(duì)此予以了詳盡的解答。
眾所zhou知，在高效液相色譜檢測(cè)中要使用高純度稀釋劑作為流動(dòng)相，在此有不同純度指標(biāo)的稀釋劑可供選用，例如HPLC級(jí)稀釋劑、梯度級(jí)稀釋劑以及LC-MS級(jí)稀釋劑。在色譜分析中，應(yīng)用不同稀釋劑的質(zhì)量和稀釋劑的純度之間有什么關(guān)系?稀釋劑的質(zhì)量為何要與檢測(cè)任務(wù)保持匹配?
稀釋劑的質(zhì)量表示的是：它們是由同一種原料生產(chǎn)的，理論上只有微量雜質(zhì)(根據(jù)不同的產(chǎn)品：99.8%~99.9%)。但這微量的雜質(zhì)卻會(huì)在色譜分析中因不同的檢測(cè)方法由被測(cè)樣本而帶來(lái)變化，此時(shí)的純稀釋劑已經(jīng)不是原來(lái)意義上的“純稀釋劑”了。下面，我們將舉例說明稀釋劑質(zhì)量的三個(gè)等級(jí)，以及使用合適質(zhì)量稀釋劑的意義。
HPLC級(jí)純度
HPLC純度主要是從利用紫外線探測(cè)儀或熒光探測(cè)儀進(jìn)行等度分離來(lái)描繪的稀釋劑質(zhì)量。這種純度的稀釋劑以高純度、高穿透性、低熒光以及低揮發(fā)殘留物和低酸堿性而著稱。
這種稀釋劑能承受特殊的清潔過濾處理，以便盡可能除去干擾物質(zhì)。這樣一來(lái)，由雜質(zhì)引起的干擾和影響也都降低到了di，還能夠降低色譜分離的背景噪音。在完成過濾后，它們將按照紫外線探測(cè)和熒光探測(cè)的方法在高效液相光譜儀中進(jìn)行測(cè)試。
經(jīng)質(zhì)量監(jiān)控可以保證：用戶可以得到始終如一的稀釋劑質(zhì)量，以確保高效液相光譜分析的高重復(fù)性。
梯度級(jí)純度
在高效液相色譜分離中，雜質(zhì)的色譜法分離除了等度分離外還常常采用梯度清洗方法。在梯度清洗過程中液相的組成成分也在發(fā)生變化，例如在反相色譜中有機(jī)物含量增加。這對(duì)于不適合按照梯度分離法配制的稀釋劑來(lái)講會(huì)明顯提高紫外線探測(cè)時(shí)的基線、對(duì)檢測(cè)方法的靈敏性的影響。為了能夠佳利用Gradient純度的稀釋劑進(jìn)行色譜分析，就必須對(duì)Gradient純度的稀釋劑進(jìn)一步清潔。除了有利用紫外線和熒光進(jìn)行探測(cè)的性能之外，還要對(duì)其梯度分離特性進(jìn)行核查，從而保證Gradient純度的稀釋劑在一個(gè)批次的檢驗(yàn)中質(zhì)量穩(wěn)定。
LC-MS級(jí)純度
隨著實(shí)驗(yàn)室引進(jìn)了超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)，由于其具有較高的靈敏度，也對(duì)稀釋劑提出了一些新的要求。因此，在質(zhì)譜分析中應(yīng)用的焦點(diǎn)，主要是針對(duì)低離子背景和高離子化效率。這樣，稀釋劑就要進(jìn)行相應(yīng)的凈化處理，而為關(guān)鍵的就是要清除微量元素、有機(jī)物質(zhì)成分和(金屬)離子。因?yàn)樗鼈兡軌驇?lái)很高的背景噪音，還會(huì)在內(nèi)收過程中將被分析物質(zhì)收進(jìn)來(lái)，從而明顯降低檢測(cè)的靈敏度。在質(zhì)量監(jiān)控時(shí)，將對(duì)利血平(m/z
609.49)的測(cè)試作為稀釋劑質(zhì)量監(jiān)控的標(biāo)準(zhǔn)。
在測(cè)試過的質(zhì)量范圍內(nèi)只有很小的背景噪音，沒有因雜質(zhì)帶來(lái)的干擾信號(hào)。由于LC-MS純度的稀釋劑有很高的純凈度，因此也非常適合在超高效液相色譜分析中使用。由于其能保證超高效液相分析柱有較長(zhǎng)的使用壽命，因此也對(duì)其在紫外和熒光探測(cè)中的適應(yīng)性進(jìn)行核查。
小結(jié)
不同質(zhì)量的稀釋劑都有其存在的理由，實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行分析工作時(shí)應(yīng)根據(jù)需求選取適當(dāng)?shù)南♂寗┦牵挥羞@樣，才能確保批次的色譜分析得到準(zhǔn)確、可重復(fù)的檢測(cè)結(jié)果。
高效液相色譜分析技術(shù)中的純度
除了HPLC級(jí)、梯度級(jí)和LC-MS級(jí)純度之外，有些生產(chǎn)廠家還使用了介于梯度級(jí)和LC-MS級(jí)之間的稀釋劑純度，使用低純度稀釋劑雖然可行但卻容易帶來(lái)一定的風(fēng)險(xiǎn)。由于從生產(chǎn)廠方?jīng)]有zhi定高純度質(zhì)量監(jiān)控的方法，色譜分析結(jié)果的正確性和重復(fù)精度都無(wú)法得到保障，每一新批次的色譜分析都會(huì)因高背景噪音或者干擾峰而得到令人吃驚的結(jié)果。
