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單細(xì)胞分離的特點應(yīng)用以及小技巧
發(fā)布時間：2021-09-06瀏覽次數(shù)：921返回列表
單細(xì)胞分離采用類似噴墨打印機以及一次性分配分離槽，溫和高效地接種單細(xì)胞，使用明場高分辨率成像或可選熒光分選細(xì)胞，每個單細(xì)胞分離捕獲 5張圖像，單克隆性，提高工作效率，保持并增強細(xì)胞活率，且防止交叉污染。
采集單細(xì)胞分離的證據(jù)，在接種細(xì)胞時記錄5張連續(xù)圖像，以96或384孔板的形式提供直接的單克隆性圖像證據(jù)，提高克隆形成率，與傳統(tǒng)方法相比，在克隆形成率上可實現(xiàn)高達(dá)8倍的提升。
保持細(xì)胞健康和無菌，正如克隆生長實驗所見，通過溫和的分離維持細(xì)胞活性，并使用無菌的一次性單向分離槽防止交叉污染，簡便、快速、可選擇以及無損分離單細(xì)胞，簡化遺傳和克隆培養(yǎng)、分析中分離過程。快速高效接種單個活細(xì)胞至微孔板分離系統(tǒng)的主要功能為高效柔和地分離或分選活的單細(xì)胞。該系統(tǒng)通過微流控技術(shù)柔和地形成細(xì)胞液滴，同時利用白光和熒光成像實時分析細(xì)胞數(shù)量和熒光強度，將符合要求的單細(xì)胞液滴準(zhǔn)確接種至96孔板。
主要特點
1.分離效率>85%，單細(xì)胞活率>75%；
2.記錄分離前后的連續(xù)5張圖像，用于支持細(xì)胞株的單克隆性；
3.采用一次性分離槽，省卻系統(tǒng)的清洗驗證，減小交叉污染的風(fēng)險；
4.采用白光成像和熒光成像，可根據(jù)細(xì)胞直徑、圓度以及熒光強度篩選出感興趣的細(xì)胞；
5.內(nèi)置除靜電裝置，消除微孔板靜電，確保細(xì)胞液滴接種至微孔正中間，尤其是PCR板。
單細(xì)胞分離系統(tǒng)可代替?zhèn)鹘y(tǒng)的有限稀釋法，高效地將單個活細(xì)胞接種至微孔板中。得益于分離系統(tǒng)的高效率和高活率，可以將每塊微孔板中可獲得的單克隆細(xì)胞團(tuán)提高至多8塊，從而在相同的工作量下可篩選多的細(xì)胞克隆，從中發(fā)現(xiàn)多優(yōu)質(zhì)的細(xì)胞株。分離過程中記錄的連續(xù)5張圖像，可以與后續(xù)的孔板成像的圖像證據(jù)互相補充，從而提高單克隆性的可信度。
應(yīng)用范圍：連接不同管徑大小的毛細(xì)玻璃針，可分離捕獲各種非貼壁狀態(tài)的單細(xì)胞和微粒等，如細(xì)菌、酵母、藻類細(xì)胞、植物花粉、原生動物單細(xì)胞、懸浮細(xì)胞、血液細(xì)胞、免疫細(xì)胞、卵細(xì)胞、各種懸液中單細(xì)胞及特殊標(biāo)記的單細(xì)胞等。
單細(xì)胞分離的小技巧
1. 縮短制備單細(xì)胞懸液的時間，以保留細(xì)胞活力
2. 考慮使用細(xì)胞篩來過濾出細(xì)胞團(tuán)塊或雙細(xì)胞
3. 注意緩沖液的選擇，包括分選和收集溶液
4. 如果您打算在分選后培養(yǎng)細(xì)胞，請使用對數(shù)生長期的細(xì)胞，并確定佳培養(yǎng)條件
5. 在分選轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞時，通常在轉(zhuǎn)染后72小時進(jìn)行，以提高細(xì)胞群的生存能力
6. 如果采用熒光抗體來分離稀有細(xì)胞，請在染色前離心抗體，以便去除任何可能被誤認(rèn)為是靶細(xì)胞的熒光顆粒
7. 對于單細(xì)胞基因組學(xué)應(yīng)用，在分選后別忘了離心平板，以確保細(xì)胞在孔的底部
8. 選擇一種可靠的分析技術(shù)來評估分選細(xì)胞的數(shù)量和質(zhì)
