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HE染色石蠟切片的制作的七個步驟
發布時間：2021-06-18瀏覽次數：1156返回列表
設備用具：切片機、恒溫箱、溶蠟箱、玻璃缸、載玻片、蓋玻片、手術刀片、鑷子、包埋盒。
試 劑 ：10％福爾馬林、酒精、二甲-苯、固體石蠟、蘇木-精、酸水、氨-水、酒精伊紅染色劑型、加拿大樹膠
（二）HE染色石蠟切片的制作過程
步驟一：取材與固定：
取動物新鮮組織塊(一般厚度不超過0．5厘米)投入預先配好的固定液中(10％福爾馬林，Bouin氏固定液)使組織、細胞的蛋白質變性凝固，以防止細胞死后的自溶或細菌的分解，從而保持細胞本來的形態結構。
步驟二：脫水透明：
一般用由低濃度到高濃度酒精作脫水劑，逐漸脫去組織塊中的水份。再將組織塊置于既溶于酒精，又溶于石蠟的透明劑二甲-苯中透明，以二甲-苯替換出組織塊的中酒精，才能浸蠟包埋。
步驟三：浸蠟包埋：
將已透明的組織塊置于已溶化的石蠟中，放入溶蠟箱保溫。待石蠟完全浸入組織塊后進行包埋：先制備好容器(如折疊一小紙盒)，倒入已溶化的石蠟，迅速夾取已浸透石蠟的組織塊放入其中。冷卻凝固成塊即成。包埋好的組織塊變硬，才能在切片機上切成很薄的切片。
步驟四：切片與貼片：
將包埋好的蠟塊固定于切片機上，切成薄片，一般為5—8微米厚。切下的薄片往往皺折，要放到加熱的水中燙平，再貼到載玻片上，放45℃恒溫箱中烘干。
步驟五：脫蠟
常用HE染色，以增加組織細胞結構各部分的色彩差異，利于觀察。蘇木-精(Hematoxylin，H)是一種堿性染料，可將細胞核和細胞內核糖體染成藍紫色，被堿性染料染色的結構具有嗜堿性。伊紅(Eosin，E)是一種酸性染料，能將細胞質染成紅色或淡紅色，被酸性染料染色的結構具有嗜酸性。染色前，須用二甲-苯脫去切片中的石蠟，再經由高濃度到低濃度酒精，蕞后入蒸餾水，就可染色。
步驟六：染色
HE染色過程是：
①將已入蒸餾水后的切片放入蘇木-精水溶液中染色數分鐘。
②酸水及氨-水中分色，各數秒鐘。
③流水沖洗1小時后入蒸餾水片刻。
④入70％和90％酒精中脫水各10分鐘。
⑤入酒精伊紅染色液染色2—3分鐘。
步驟七：脫水透明：
染色后的切片經純酒精脫水，再經二甲-苯使切片透明。
步驟八：封固：
將已透明的切片滴上加拿大樹膠，蓋上蓋玻片封固。待樹膠略干后，貼上標箋，切片標本就可使用。
