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pH對酶促反應(yīng)速度的影響
發(fā)布時間:2021-06-11瀏覽次數(shù):1241返回列表
【目的和要求】
1. 了解pH對酶促反應(yīng)速度的影響。
2. 學(xué)習(xí)測定酶的蕞適pH的方法。
【實(shí)驗(yàn)原理】
酶促反應(yīng)受環(huán)境pH的影響極為顯著。 通常各種酶只有在一定的pH范圍內(nèi)才表現(xiàn)它的活力,一種酶表現(xiàn)其活性蕞高時的pH值,稱為該酶的蕞適pH。低于或高于酶的蕞適pH時,酶的活性逐漸降低。不同酶的蕞適pH值不同。本實(shí)驗(yàn)仍以乳酸脫氫酶催化的反應(yīng)為例,學(xué)習(xí)測定酶的蕞適pH的方法。
【實(shí)驗(yàn)試劑和器材】
(一)試劑:
1. 不同pH值的緩沖液:
100ml 0.33M檸檬酸,100ml 0.33M磷酸,3.54g 硼-酸,343ml 1M NaOH, 加水直到1升。用HCl滴定成pH值3.0、3.5、4.0、4.5直到12的不同pH值緩沖液。
2. 0.01M NADH
3. 0.1M 丙酮酸鈉
4. LDH
【實(shí)驗(yàn)試劑和器材】
(一)試劑:0.1M磷酸鉀緩沖液(pH 7.0);0.01M NADH; 10M 丙酮酸鈉;LDH
(二)器材:紫外分光光度計 ,移液槍,吸頭,1.5ml小離心管,離心管架
【實(shí)驗(yàn)方法】
(一)酶活性的測定:方法同實(shí)驗(yàn)7中的步驟1。
(二)pH對酶促反應(yīng)速度的影響:
1. 在1.5 ml小離心管中分別加入:(總體積為1ml反應(yīng)液)
2. 混勻以上試劑,倒入比色皿中,然后將比色皿放入分光光度計后讀取340nm處OD值,加入0.02ml LDH使用液,迅速攪勻,使反應(yīng)開始,測定反應(yīng)1分鐘OD值的變化。
3. 根據(jù)所測得的OD值的變化,計算出反應(yīng)初速度








