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蛋白提取操作時的注意事項
發布時間：2021-03-16瀏覽次數：1151返回列表
避免蛋白降解
總體規則：蛋白酶普遍存在，在提取蛋白質的步驟中，早些抑制，經常抑制
分裝蛋白溶液，儲存于不同的溫度和不同的緩沖液中，測蛋白活性，找出zui適儲存條件。
冷藏，并加入穩定劑。這些穩定劑一般都能充分保持蛋白的生物學活性。
將蛋白溶液儲于50%（V/V)的甘油或懸于硫酸銨（3.2M）中，避免凍存
冰結晶會造成物理剪切及蛋白變性。
避免酶的反復凍融，如果酶需要凍存，分裝成小管后凍存。
蛋白質的儲存
蛋白樣品在液氮中速凍，拿出后加入10-20%的甘油，長期儲存
整個實驗過程中，都要將蛋白樣品置于冰上
從母管中吸取不同的蛋白時，都要用新鮮的槍頭
不要將未用的溶液倒回母管
戴手套操作，避免蛋白交叉污染，或是蛋白酶的污染
避免劇烈的震蕩，避免溶液中混入蛋白變性劑
實驗的過程中應避免灰塵進入，灰塵包含60%的肌氨酸
操作過程中
操作時總是小體積小量的操作，避免污染，并且動作要快
a：此類蛋白酶在活性中心包含絲氨酸和組氨酸。
b：此類蛋白酶在活性中心包含半胱氨酸（巰基，-SH-）。
c：此類蛋白酶在活性中心包含金屬離子（如：n2+，Ca2+，Mn2+）。
d：此類蛋白酶在活性中心包含天冬氨酸族
