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菌種保藏原理與步驟！
發布時間：2020-09-25瀏覽次數：1064返回列表
菌種代號的意義
國內常見微生物檢驗所用的菌種代號是CMCC（F）或 CMCC（B）
CMCC -- 中國醫學菌種保藏中心
B -- 代表細菌， F --代表真菌。
大腸桿菌[CMCC (B) 44102]；
乙型副傷寒沙門桿菌[CMCC (B) 50094]；
銅綠假單胞菌[CMCC (B)10104]；
金黃色葡萄球菌[CMCC (B)26003]；
生孢梭菌[CMCC(B)64941]；
白色念珠菌[CMCC(F)98001]。
常用菌種保藏方法
(一) 菌種保藏的原理
根據微生物的菌種生-理、生化特性，在人工創造的條件下盡量降低微生物細胞的代謝強度，使細胞基本處于休眠狀態，生長繁殖受到抑制但又不至于死亡，以減低菌種的變異率。低溫、干燥、缺氧、缺乏營養等環境條件都有抑制微生物的代謝作用。
低溫、干燥、真空是用于菌種保藏的重要手段。
選擇保藏方法時，首先應考慮方法能否長期地保持菌種原有的特性，同時也應兼顧到方法的經濟和簡便。在實際工作中，往往多種條件同時使用，以提高保藏效果。
（二）菌種保藏步驟
① 挑選特征典型的純菌菌落；
② 確定保藏的合適菌體形態；
③ 選擇zui適宜的保藏方法；
④ 定期對保藏菌種進行檢查，觀察是否發生變化，若有變化，須改變保藏方法。保藏期滿應及時進行移種。
1.瓊脂斜面低溫保存法
（1）方法：將經常使用的菌種的典型菌落接種在斜面（某些特殊菌種可用液體培養基）上，按規定的溫度和時間培養，待充分生長后，把培養好的新鮮菌種用牛皮紙保好，為減緩培養基的水分蒸發，延長保藏時間，可將菌種保藏管的棉花塞換成橡膠塞。放在4℃左右的冰箱中保藏。每隔 2~3個月移種一次，繼續進行保藏。若用半固體高層培養基穿刺培養，一般可保藏半年 ~ 一年。有的甚至geng長時間。
（2）適用范圍：細菌、酵母菌、霉菌保藏。
（3）特點：優點是--簡便，易于推廣；一般不需要另選擇保藏用培養基；對大多數微生物都適用；缺點是--保藏期太短；傳代次數多，易發生變異及污染。
（4）注意事項：保藏的菌種應是生命活力旺盛的新鮮培養物，至少應是第三代的培養物。
保藏時，破傷風桿菌可用庖肉培養基；生孢梭菌用流體硫乙醇酸鹽培養基。必須定期檢查保藏菌種冰箱的溫度、濕度以及菌種管的棉塞是否松動或生霉，如有異常應及時處理。
每次移植后，應與原菌種的編號、名稱逐一核對，確證培養基特征和純度無誤后再繼續保藏。
保藏菌種的培養基應無糖，其他菌類含糖小于2%為宜，以免產酸過多，影響菌種存活。
銅綠假單胞菌在冰箱中易發生菌體自溶而死亡，不宜用本法保存。
2. 液體石蠟保存法
本法是用石蠟將培養物與空氣隔絕，以降低菌種的生-理生化水平，并可防止水分蒸發，從而延長菌種的保藏期。
（1）方法：將菌種接種于斜面或穿刺于0.3~0.5 %瓊脂半固體高層培養基中，培養好備用。取化學純的液體石蠟裝在試管中，每管10~15mL，加棉塞，瓶口包上紙，121℃高壓滅菌30min，取出置37℃溫箱或110~170℃烤箱中1~2h或干燥器內除去液體石蠟中的水分。
將上述液體石蠟加入培養好的菌種試管內，液體石蠟液面以高出培養基zui上端1㎝為宜，將試管直立，放入4℃冰箱中保藏。
（2）適用范圍：適用于保藏部分霉菌，酵母菌和放線菌，對細菌保藏效果較差。
（3）特點：本方法簡便易行，是實驗室常用的一種保藏方法，該法主要使菌種與空氣隔絕。
（4）注意事項：
① 保藏時，用新鮮培養物接種，應檢查純度和特征后，方可進行保藏；
② 保藏過程中，需經常觀察斜面是否干燥，如干燥， 需重新移種；
③ 使用菌種時，先將菌種管傾斜使液體石蠟流至一邊，再用接種針挑取培養物接種到新鮮斜面上培養，待長出新培養物后，再移種一次到新斜面上即可使用；
④ 將沾有少量液體石蠟的接種針浸于95%酒精中片刻，再燒灼滅菌，以免直接在酒精燈下燒灼時，液體石蠟四濺，引起污染；
⑤ 液體石蠟在菌種管中高出培養基的高度要嚴格控制，如太多，會影響菌種交換氣體，使保藏效果不好；如太少,斜面容易干燥，將縮短保藏期。一般以高出斜面1cm為宜；
⑥ 制備無菌液體石蠟時，每管裝量不能太多,否則分裝到菌種培養基中易造成污染。
菌種的復蘇與保存
菌種的復蘇與保存應在專用超凈工作臺或生物安全柜內進行。
