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兩種RT-qPCR方法的優缺點比較
發布時間：2020-06-09瀏覽次數：1322返回列表
實時聚合酶鏈反應(PCR)是基于PCR的革命性方法，這一技術是PCR高靈敏度和實時檢測相結合的結果。實時定量聚合酶鏈反應(RT-qPCR)的獨特特征就是把目的基因的擴增與熒光信號聯xi起來，并將其量化。 在定量基因表達分析,目前有兩種方法zui受歡迎, SYBR Green and TaqMan，那么這兩種哪個geng好呢？本文分別分析其優缺點。
一、熒光染料法(SYBR Green)
其原理是：在PCR反應體系中加入過量熒光染料，DNA擴增的過程中，熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈，發射熒光信號，隨著反應的進行，熒光強度逐漸增強，并且可以實時測量。如果你要擴增你的目標樣品40個循環，在zui后一個循環結束時檢測到的熒光會比在第10個循環測得的熒光強很多。
優點：
成本較低，適合大規模的實驗。
在實驗設計階段非常省時，因為它只需要合適的引物設計。
缺點：
特異性不是很高。染料可以插入任何雙鏈DNA，包括引物二聚物和非特異性產物。
如果引物二聚體存在或者產物受到污染，得到的結果會不可靠。
geng容易與低豐度的目標產生非特異性熒光。
需要geng多的時間進行結果分析。
二、寡核苷酸探針(Taqman)
這種方法涉及使用熒光標記的寡核苷酸(短DNA分子)，探針通常在5 '端和3 '端都被標記。
在探針的5’端有報告基團，3’端設計淬滅基團，當報告基團接近淬滅基團時，不會檢測到熒光信號。RT-qPCR反應時，寡核苷酸兩個基團分離，即可檢測到熒光信號，并與PCR產物同步。
使用這種方法的熒光檢測依賴于兩個過程:1)引物與目標序列的結合(2)探針與引物下游
互補序列的結合。
優點：
geng有可能只放大所需的產物，由于引物和探針的結合具有特異性。
不需要解離曲線，只有探針與正確的目的序列結合時才能檢測到熒光。
由于具有特異性，數據geng可靠。
數據分析時節省時間。
缺點：
需要大規模實驗時耗費成本高。
需要geng長的時間來設計實驗，因為需要好的引物和探針。
總的來說，這兩種熒光檢測方法都很有效，但對于你的具體實驗，可以選擇適合的方法
