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實驗時elisa競爭法檢測抗-HBe（快速法）
發布時間：2019-12-12瀏覽次數：4639返回列表
實驗原理
用抗-HBe包被固相載體后，同時加被檢血清和合適滴度中和試劑HBeAg，若被檢血清中含有抗-HBe，則與包被抗-HBe競爭結合HBeAg，被檢標本中抗-HBe越多，HBeAg被結合越多，而與包被抗-HBe結合就越少，加底物后顯色就越淺；反之越深。
主要試劑與器材
elisa試劑盒：內含已包被抗-HBe板條、HRP-抗HBe溶液、中和試劑HBeAg溶液、陽性和陰性對照血清，底物溶液（A液、B液）、終止液、洗滌液。
結果分析
P/N≤0.3為陽性。P/N＞0.3為陰性。
P/N=待檢血清OD值/陰性對照OD值。
注意事項
1、試劑置2-4℃保存。取用時應先置室溫平衡。干包被板條須密封防潮，zui好凍存，取用后余者及時封存。
2、恰當選好HBeAg的濃度。
3、試劑用前應搖勻。
操作步驟
1、加樣：取出干包板條，按編號順序分別加50μl待檢血清、陰性對照血清和陽性對照血清于相應孔中。設空白對照孔，除此孔外，每孔加HBeAg50μl、HRP-抗HBe50μl，振蕩混勻后，置43℃（或37℃）溫育1h。
2、洗滌：甩去孔內液體，用洗滌液注滿各孔，靜置20s，甩干。如此重復洗滌4次，在吸水紙上拍干。
3、顯色：每孔加顯色劑A、顯色劑B各50μl，振蕩混勻后置37℃避光顯色10-15min。
4、終止：每孔加終止液50μl，振蕩混勻。
5、酶標儀檢測：選用450nm波長，用空白孔調零之后測各孔OD值。
