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悄悄告訴你：人γ干擾素elisa實驗的過程
發布時間：2019-11-04瀏覽次數：1157返回列表
對于熱愛化學實驗的朋友們來說，這是非常有趣的一件事情。而每一個實驗，不管它的方法與類型是什么樣的，在實驗之前，我們將它的試劑、實驗器材等準備好。那么下一步，我們就要看它的操作步驟了，上海古朵悄悄告訴你：人γ干擾素elisa實驗的過程。
先我們來看本次實驗的標本要求，這里有兩項，個就是在標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。第二項要注意了，不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
了解了本次實驗的標準要求之后，下面我再來看看上海古朵為您整理出的操作步驟：
1、標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
400 ng/L 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
200 ng/L 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
100 ng/L 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
50 ng/L 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
25 ng/L 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2、加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品*終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4、配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6、加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7、溫育：操作同3。
8、洗滌：操作同5。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10、終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11、測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
以上是實驗的操作步驟，那計算方法是怎樣的呢？
我們以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。
上海古朵特別提醒您，操作人γ干擾素elisa實驗中需要注意：
1、試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2、濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3、各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4、請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請*后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6、底物請避光保存。
7、嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9、本試劑不同批號組分不得混用。
10、如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
實驗完成之后要講結果與心得記錄下來哦！這里是上海古朵生物科技有限公司，我公司產品是含稅含運費的，并且試劑盒提供代測及技術指導哦！
