如何學會分離培養人的成纖維細胞？

發布時間：2019-01-07瀏覽次數：1679返回列表

成纖維細胞（又稱皮膚成纖維細胞）屬于由中胚層分化而來的間質細胞。細胞來源于人正常的皮膚組織，成纖維細胞是一種貼壁培養方式的細胞，由于這些細胞非常容易培養，它們已經被廣泛用于細胞和分子生物學研究中。

一般而言，成纖維細胞能夠分泌I型和 III 型膠原等細胞外基質，并且研究表明不同器官中的成纖維細胞有顯著的不同。

傷口修復時，成纖維細胞由可增殖，可遷移的表型變為有收縮性的，可重塑基質的表型，同時，它們會分泌大量的透明質酸來應對修復時的炎癥反應。

以下是樊克提供的一種人成纖維細胞的制備方式（僅供參考）：

    先在分離成纖維細胞時要做到在無菌條件下進行，打開生物安全柜紫外燈 30min 作無菌處理。

    將手術廢棄的皮膚組織浸泡 75% 酒精，消毒 2min，

    將皮膚組織置含 P/S 的 PBS 中清洗至少 3 遍，

    然后用眼科剪除去脂肪及結締組織等，

    將皮膚剪成 0.5*0.5 cm 小塊，放入 dish 中，加 0.1% 的 dispase 溶液，封口膜封口，4℃ 冰箱過夜消化，

    第二天，用鑷子將表皮與分開（薄的那層是表皮，厚的那層是），

    將剪碎，移至離心管，用 0.1% 膠原 Ⅰ 型酶+0.1% 膠原Ⅱ型酶+0.1% 膠原Ⅳ型酶+ 37℃ 水浴鍋中消化至少 2 h（視消化程度而定），

    用 100 μm 網篩過濾，

    取濾液，300 g，離心5 min，

    用完全培養基重懸沉淀，

    鋪瓶，

    隔天換液。

以上是皮膚成纖維細胞分離培養的一種方式，不同的技術人員分離培養的方法也不同，使用的試劑比例也不盡相同，皮膚成纖維細胞特異性纖維連接蛋白或波形蛋白表達檢測，采用細胞免疫熒光技術。細胞純度可高達于 90%，所有的細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

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