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皮質醇ELISA試劑盒定性定量方法
發布時間：2017-06-22瀏覽次數：1722返回列表
皮質醇ELISA試劑盒測定原理：現在elisa試劑盒除非是測定抗體的以外，一般使用的是雙抗體夾心法，此種方法大多數用的是增強的雙抗體夾心法，即使用生物素-親和素系統，還有少數的指標可能使用競爭法，這類方法適用于半抗原的測定。
皮質醇ELISA試劑盒具有復雜結構的多表位蛋白抗原，其雙抗體夾心法中的一個抗體必須用單抗，否則背景很高。當然如果兩個都是單抗(這兩個單抗針對不同表位)，那么測定的線性范圍就較寬，試劑盒性能就較好；一個用單抗，一個用多抗，測定的靈敏度會較高。
某些簡單的化合物用皮質醇ELISA試劑盒測定時，因為沒有兩個或以上的表位，一般只能作為半抗原，只能用競爭法測定。如果你發現有測定簡單化合物(如雌激素、NO、地高辛等)用雙抗體夾心法作測定原理時，這個試劑盒你就要懷疑了。另外還要說明一步雙抗體夾心法與兩步雙抗體夾心法的區別。
一步雙抗體夾心法的吸光度-劑量曲線呈鐘形，隨著待則標本中抗原濃度的增加而升高至一定程度后，測定吸光度即隨抗原濃度的增加而開始下降直至不顯色，即所謂的“鉤狀效應”(hookeHect)，也就是我們在免疫沉淀試驗中所稱的“帶現象”(zonephenomenon)。所以當使用一步雙抗體夾心法時，樣品濃度太高，有時會出現測不出來的現象，此時要作適當的稀釋才能準確測定。
試劑盒的組成：用雙抗體夾心法作為測定的方法時，試劑盒的組成一般包括：已包被單抗的酶標板：一塊，有96孔的，也有48孔的，可拆缷，外面有鋁箔袋密封，打開后有干燥劑，實驗時暫未使用的酶標條要連帶干燥劑密封好，放在4℃冰箱中妥善保存。
皮質醇ELISA試劑盒的保質期一般都是在一年，如果保存得當的話，不會出現問題的。但不要反復凍融。當然如果是正常的DAS-ELISA檢測試劑盒等，應該放在4℃左右冰箱保存。建議elisa試劑盒解凍后一次用完。已開封或者使用后，剩余試劑仍需按照試劑瓶標簽所示的溫度保存，ELISA檢測試劑盒開封后的酶標板要加干燥劑后密封保存于-20℃，避免潮濕。
但要注意的是，如果將elisa試劑盒剛從冰箱里面拿出來就立即使用的話，可能會影響，其直接的后果是對一些弱陽性標本的檢測出現假陰性。
建議：先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20分鐘以上后，再進行測定，以使試劑盒在ELISA檢測試劑盒使用前與室溫平衡。這樣做的目的，主要是為了在后面的溫育反應步驟中，能使反應微孔內的溫度能較快地達到所要求的高度，以滿足測定要求。
那么皮質醇ELISA試劑盒的板子什么情況下會失效？
1．通常商品化的酶標板要求密閉4℃保存，長時間暴露或未密閉保存，要么失效，要么結果為非可靠數據；如果是自己包的板，可能效期更短，保存條件要求更高，至于顯色劑，正常條件下一天內不會失效的。
2．第三板是否完全按照前兩板加所有試劑，如果缺失其中某一步驟，結果也會無色。
