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ELISA測定試劑盒手工操作方法
發布時間：2017-06-09瀏覽次數：1734返回列表
導讀：ELISA測定試劑盒是用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎（HEV）病毒 IgM 抗體ELISA檢測。ELISA試劑盒試驗是一種敏感性高，特異性強，重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩定、易保存，操作簡便，結果判斷較客觀等因素，已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。
ELISA測定試劑盒手工操作有浸泡式和流水沖刷式兩種，浸泡式進程如下：
A、吸干或甩干孔內反應液；
B、用洗刷液過洗一遍（將洗刷液注滿板孔后，即甩去）；
C、浸泡，即將洗刷液注滿板孔，放置1-2分鐘，間歇搖晃，浸泡時間不可隨意縮短；
D、吸干孔內液體，吸干應徹底，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液體后在清洗毛巾或吸水紙上拍干；
E、重復操作c和d，洗刷3-4次（或按說明規矩）。
ELISA測定試劑盒操作技術的影響：
1）應保證清潔，整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸，以上的措施可以使“花板”降至低限度，從而提高檢測的特異性，并得到更準確。
2）合理安排檢測量，ELISA試劑盒以免反應板過多造成洗板等待時間長。
3）加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4）用洗板機洗板時，保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干，防止針口有纖維蛋白或異物，這些異物在洗板的過程中易產生拖帶現象而導致“花板”的出現。
5）嚴重溶血：以HRP為標記的ELISA試劑盒測定中，殘留在孔內的血紅蛋白具有過氧化物酶樣活性，催化底物顯色造成假陽性。
減少ELISA測定試劑盒誤差的方法
1.做實驗時少說話，防止唾液掉進酶標條中。
2.加入一抗二抗需要放入37°。
3.如果同時做多個板子，多個板子別羅一起；盡量少用排槍。
4.加樣時，由低濃度向高濃度加，這樣減少跳孔的幾率。
5.勤換槍頭。
一、移液器的使用，加樣（抗體）等需要準確定量的試劑時不使用排槍，經驗證明排槍很不準確，易跳孔，不要圖買低檔的tips 因為ELISA不但會放大被檢測的目的蛋白，也會放大非特異結合的雜質蛋白。
二、倍比稀釋樣品時，稀釋倍數要小于10。
三、所有的裝跟ELISA測定試劑盒相關試劑的容器，玻璃制品的要干烤過或者使用一次性的樹脂容器。
