HR0959-100T 線粒體膜通透性轉換孔(MPTP)檢測試劑盒
- 產品/服務：HR0959-100T 線粒體膜通透性轉換孔(MPTP)檢測試劑盒
- 型 號：HR0959-100T
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-06-02
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：935
本試劑盒按每個樣品500μL計算，可供200-1000次檢測。CA最大激發波長495nm，最大發射波長515nm。實際檢測時推薦使用的激發波長為488nm左右，發射波長為510～530nm。可以使用流式細胞儀或激光共聚焦顯微鏡檢測細胞內mPTP的變化。...
試劑盒以外自備試劑和儀器：
● Hanks balanced salt solution（HBSS）或HEPES或PBS ● 移液器 ● 流式細胞儀/激光共聚焦顯微鏡
注意事項：
● 螺旋蓋微量管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體灑落。
● 細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
● 染色后立即進行分析。
● 標記的條件因細胞種類而異，根據不同樣本的實際染色結果做相應調整，在每次實驗前，請先確定最佳條件。以下方法僅供參考。
● CA1容易受潮，穩定性較差，注意干燥保存。
使用方法：
1、染色工作液的配制：
1.1 1×MPTP 染色buffer配制：用純水10倍稀釋10×MPTP染色buffer， 配制1×MPTP染色buffer。
1.2 CA1染色工作液配制：根據樣品數量用1×MPTP 染色buffer稀釋CA1探針500倍，配制成CA1染色工作液，充分混勻。
2、細胞染色
2.1 將樣品細胞制備成單細胞懸液，使其密度為1×106細胞/mL。
【注】：
● 用于加Ca2+通透劑的對照樣品的緩沖液必須含有Ca2+；
● CA1探針加載時不能含有血清；
● 細胞必須為單細胞懸液。
2.2 按照500μL每管將細胞懸液等分，每個樣品等分成3份，并記錄編號。
【注】：
● 后續染色順序：1號管僅含CA1探針，2號管含CA1探針和淬滅劑，3號管含CA1探針，淬滅劑和通透劑，另外準備一管不加試劑的細胞樣品用于相應的儀器設置。
2.3 向上述每個樣品的3管中分別加入3μL CA1探針工作液并混勻。
【注】：
● 推薦該探針加載濃度在200-400倍稀釋，具體的使用濃度需根據實驗要求進行優化。為了避免過度加載造成細胞毒性，建議在取得有效結果的基礎上盡量使用最低探針濃度。
2.4 向2號、3號管中加入5μL淬滅劑，并混勻。
2.5 向3號管中加入5μL 通透劑，并混勻。
2.6 在37℃避光孵育15分鐘。
2.7 向每管中加入3mL 1×MPTP染色buffer，離心收集細胞。
【注】：
● 此步可去除多余染料以及可能引起熒光淬滅的試劑。
2.8 用400μL同時可用于流式檢測的合適的緩沖液重懸細胞。
【注】：
● 如果需要，也可進行進一步染色。如用標記的Annexin V檢測磷酯酰絲氨酸易位(HR0399)；用PI檢測細胞活力；或者用M11探針檢測線粒體活力等。注意整個過程均需避光操作。
2.9 染色后，將樣品置于冰上，1 小時內進行流式分析。
3、細胞檢測
用不含試劑的細胞樣品進行相應的儀器設置。用流式488 激發器進行熒光分析，CA1探針最大激發波長495nm，最大發射波長515nm。
1號管-僅含CA1探針：線粒體和胞漿有熒光，熒光信號較強；
2號管-含CA1探針和淬滅劑：僅線粒體呈現熒光，熒光強度居中；
3號管-含CA1探針，淬滅劑和通透劑：線粒體和胞漿熒光均被淬滅，熒光信號最弱。
2號管和3號管熒光信號的變化說明線粒體通透性轉換孔被不斷的激活。
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