HR0119-50 高脂肪樣本蛋白提取試劑盒
- 產品/服務：HR0119-50 高脂肪樣本蛋白提取試劑盒
- 型 號：HR0119-50
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-06-02
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：913
高脂肪樣本蛋白提取試劑盒適用于從各種脂肪含量高的細胞和實體組織，如脂肪細胞、脂肪肝細胞、腦、脂肪、脂肪肝臟、結締組織、胸腺組織等動物組織中提取總蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內完成。...
試劑盒以外自備試劑和儀器：
● 移液器 ● 離心機 ● 渦旋混勻器 ● 振蕩器 ● PBS
注意事項：
● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
● 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
● 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
● 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
● Western 實驗內參可以選用beta-actin、GAPDH、TubμLin。
使用方法：
細胞蛋白提取：
1、提取液制備：
每500μL冷的蛋白提取液中加入2μL 蛋白酶抑制劑混合物混勻后置冰上備用。
【注】：
● 根據需要處理的樣品數量準備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。
● 蛋白樣品用于測定某些細胞內蛋白酶、磷酸酶活性等下游實驗時，注意根據實際情況調整抑制劑混合物是否加入。
2、取5-10×106個細胞，在4℃，2000×g條件離心5-10分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集細胞。
3、用冷 PBS洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4、每 5×106個細胞中加入500μL冷的蛋白提取液，混勻后，在4℃條件下振蕩15-20分鐘。
【注】：
● 用振蕩器/搖床的較低轉速，保持液體稍微晃動即可。
● 沒有振蕩條件可以不振蕩，置4℃靜置即可，稍微延長時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。
5、套上液體收集管，將提取液吸入蛋白離心管中，在4℃，10000×g條件下離心5分鐘。
【注】：
● 蛋白離心管適用于過濾除去不溶性大顆粒組織固體雜質，固態脂肪等，如果是做脂肪含量低的細胞或無明顯固體不溶物時，可以不使用離心柱，直接將勻漿液離心即可。
● 提取液液面有脂滴時，可以用移液器小心吸除脂滴即可。
● 蛋白液里的微量脂肪需要直接過濾除去，可以使用我們的蛋白去脂肪柱。
● 離心前蛋白液會在重力作用下自然流穿離心柱，一定要先套上收集管再吸入蛋白液。
6、將液體收集管中的液體吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到蛋白樣品。
7、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。
【注】：
● 建議用BCA法進行蛋白定量。
● 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。
組織蛋白提取：
1、提取液制備：
每500μL蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
【注】：
● 根據需要處理的樣品數量準備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。
2、取100mg-200mg組織樣本剪碎，加入500μL蛋白提取液，用組織勻漿器/勻漿機充分勻漿。
【注】：
● 如果組織樣品很細小，可剪碎后直接加入提取液振蕩15分鐘，可以不用勻漿器。
● 也可用液氮研磨的方法，常用操作即可。
3、將組織勻漿吸入一預冷的干凈離心管中，在4℃條件下振蕩15-30分鐘。
【注】：
● 用振蕩器/搖床的較低轉速，保持液體稍微晃動即可。
● 沒有振蕩條件可以不振蕩，置4℃靜置即可，稍微延長時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。
4、套上液體收集管，將提取液吸入蛋白離心管中，在4℃，10000×g條件下離心5分鐘。
【注】：
● 蛋白離心管適用于過濾除去不溶性大顆粒組織固體雜質，固態脂肪等，如果是做脂肪含量低的細胞或無明顯固體不溶物時，可以不使用離心柱，直接將勻漿液離心即可。
● 提取液液面有脂滴時，可以用移液器小心吸除脂滴即可。
● 蛋白液里的微量脂肪需要直接過濾除去，可以使用我們的蛋白去脂肪柱。
● 離心前蛋白液會在重力作用下自然流穿離心柱，一定要先套上收集管再吸入蛋白液。
5、將液體收集管中的液體吸入另一預冷的干凈離心管，在4℃，10000×g條件下離心5分鐘。
6、將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到蛋白樣品。
7、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。
【注】：
● 建議用BCA法進行蛋白定量。
● 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。
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